CRX基因诱导Müller细胞源性干细胞定向分化为光感受器细胞的实验研究

摘要：

目的 研究外源性视锥视杆细胞同源盒(CRX)基因是否能够诱导体外培养的视网膜Müller细胞源性干细胞向光感受器细胞定向分化.方法 实验研究.体外培养、扩增出生5～7 d昆明小鼠视网膜Müller细胞,通过无血清培养去分化为干细胞.采用免疫细胞化学法分别鉴定Müller细胞(GS和Vimentin)和干细胞(Nestin和Sox2)标志物的表达.取第2代祖细胞分为3个组:空白对照组、空载体组[采用只含绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒转染细胞]、CRX组(用含GFP+CRX基因的慢病毒转染细胞).诱导分化7 d后,采用q-PCR、免疫印迹法检测光感受器细胞标志CRX蛋白、视紫红质(Rhodopsin)、感光蛋白S-opsin的表达差异.组间均数的两两比较采用独立样本t检验.结果体外培养的Müller细胞96.03％±1.21％同时表达GS和Vimentin标志物,去分化后表达干细胞标志物Nestin和Sox2.CRX诱导分化7 d,CRX和Rhodopsin表达均明显增加,部分细胞发生神经元样改变.CRX组、空载体组及空白对照组CRX mRNA相对表达量分别为10.830±2.301、1.214±0.469、1.000±0.576,CRX组与空白对照组相比,差异有统计学意义(t=1.57,P=0.02),空载体组与空白对照组相比,差异无统计学意义(t=0.29,P=0.84).CRX组、空载体组及空白对照组Rhodopsin mRNA相对表达量分别为26.410±16.180、1.301±0.401、1.000±0.473,CRX组与空白对照组相比,差异有统计学意义(t=4.15,P=0.01),空载体组与空白对照组相比,差异无统计学意义(t=0.49,P=0.80).CRX组、空载体组、空白对照组CRX蛋白相对表达量分别为1.258±0.358,0.471±0.168,0.442±0.152.未检测到S-opsin的表达.结论 CRX基因能够诱导小鼠Müller细胞源性干细胞定向分化为视杆细胞,表明Müller细胞可以作为视网膜光感受器细胞替代治疗的内源性种子细胞.

关键词：Müller细胞、干细胞、分化、CRX基因、光感受器

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资助基金：国家自然科学基金81470653 National Natural Science Foundation of China81470653

在线出版日期：2018-12-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：923-928