10.3760/cma.j.issn.0412-4081.2016.09.010
Rho相关激酶抑制剂thiazovivin对人角膜内皮细胞形态和功能影响的研究
目的:探讨N-芐基-2-(嘧啶-4-基氨基)(Thiazovivin)对人角膜内皮细胞(HCEC)形态和功能的影响。方法实验研究。培养原代HCEC,采用光镜观察细胞形态及神经元特异性烯醇化酶(NSE)的免疫荧光实验进行鉴定。以N-钙黏着蛋白(N-cadherin)和钠钾泵(Na+/K+-ATPase)为指标,通过免疫荧光实验考察添加不同浓度(0、2、4、6μmol/L)Thiazovivin作用不同时间(24及48 h)对原代HCEC形态和离子泵功能的影响,以期筛选出改善HCEC形态和离子泵功能效果最佳的Thiazovivin的浓度及作用时间。最后通过免疫荧光实验和免疫印迹实验考察Thiazovivin对Rho相关激酶(ROCK)表达的影响。结果培养的原代HCEC的NSE染色均匀,荧光强度明显,细胞呈六边形紧密排列。原代HCEC在0、2、4、6μmol/L的Thiazovivin分别作用24 h后,Na+/K+-ATPase抗体染色后的平均吸光度(A)值分别为1.27±0.08、3.72±0.17、21.07±4.67、3.69±0.34,4μmol/L的Thiazovivin的Na+/K+-ATPase免疫荧光表达最强,其A值最大;通过N-cadherin免疫荧光染色,发现HCEC在4μmol/L Thiazovivin作用24 h后,细胞轮廓清晰,细胞结构完整。而4μmol/L的Thiazovivin作用时间延长至48 h,通过N-cadherin和Na+/K+-ATPase免疫荧光染色,发现与其作用24 h相比,荧光强度无明显变化,但细胞排列比24 h时略整齐。此外,Thiazovivin能减弱ROCK免疫荧光染色的荧光强度及下调ROCK蛋白表达。结论 Thiazovivin对原代HCEC的形态、连接和离子泵功能具有保护作用,4μmol/L Thiazovivin作用24 h对细胞形态、连接及离子泵功能的改善效果最佳,且Thiazovivin可显著抑制ROCK蛋白表达。(中华眼科杂志,2016,52:686-692)
内皮、角膜、内皮细胞、嘧啶类、噻唑类、rho相关激酶类
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R73;R39
2016-09-27(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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