TAK1促进人晶状体上皮细胞上皮间质转化的体外研究

摘要：

目的 探讨转化生长因子活化蛋白激酶1(TAK1)在LEC上皮间质转化中的作用.方法 实验研究.构建TAK1-pcDNA3和转化生长因子活化蛋白激酶1结合蛋白1(TAB1)-pcDNA3表达载体,采用脂质体介导转染技术将TAK1-pcDNA3和TAB 1-pcDNA3表达载体瞬时转染入人LEC系人晶状体上皮(HLE)B-3细胞中,免疫印迹法测定验证过表达效果.免疫印迹法及免疫荧光染色检测LEC中TAK1、磷酸化的TAK1、E-cadherin和纤维连接蛋白的表达.采用实时定量PCR分析LEC中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原的表达.计量资料比较采用Student”st检验、单样本的t检验或单因素方差分析(多重比较采用LSD检验).结果 通过构建人TAK1-pcDNA3和TAB1-pcDNA3表达载体获得TAK1和TAB1共同过表达的HLE B-3细胞.免疫印迹法测定TAK1蛋白表达量,TAK1-pcDNA3过表达组(1.00±0.03)与对照组(0.19±0.09)对比:t=8.02,P＜0.01;TAB1蛋白表达量,TAB1-pcDNA过表达组(1.00±0.02)与对照组(0.22±0.08)对比:t=7.63,P＜0.01.TAK1和TAB1共同过表达促使HLE B-3细胞内的E-cadherin表达下调:免疫印迹法测定E-cadherin蛋白表达量/Beta-actin,对照组、TAK1和TAB1共同过表达组、TAK1过表达组、TAB1过表达组分别为1.00±0.02、0.12±0.03、0.98±0.09、0.92±0.08(F=31.03,P＜0.01);而纤维连接蛋白表达上调:免疫印迹法测定纤维连接蛋白表达量/Beta-actin,对照组、TAK1和TAB1共同过表达组、TAK1过表达组、TAB1过表达组分别为0.11±0.03、1.00±0.05、0.16±0.04、0.21±0.05(F=35.12,P＜0.01),TAK1和TAB1共同过表达使LEC发生上皮间质转化.HLE B-3细胞在TGF-β2的刺激下明显发生上皮间质转化,但这种效果被TAK1 siRNA和TAK1化学抑制剂所抑制.结论 TAK1可诱导HLE B-3细胞发生上皮间质转化.

关键词：晶体、上皮细胞、上皮-间质转化、MAP激酶激酶激酶类、衔接蛋白质类,信号转导

所属期刊栏目：52

资助基金：Natural Science Foundation of China81270984;国家自然科学基金81270984

在线出版日期：2016-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：278-284