TSLPR/STAT5信号通路在角膜基质细胞抗烟曲霉菌感染免疫调控的体外研究

摘要：

目的 研究胸腺基质淋巴细胞生成素受体(TSLPR)/信号转录活化子5(STAT5)在人角膜基质细胞(THSF)抗烟曲霉菌感染免疫中的作用.方法 实验研究.免疫荧光检测正常培养条件下角膜基质细胞TSLPR的表达.将人重组TSLP蛋白(hTSLP)添加至培养基中,于5、15、30、60 min收取细胞,免疫印迹法检测磷酸化STAT5(p-STAT5)和STAT5的蛋白表达.烟曲霉菌刺激细胞后,于1、3、6、12、24、48 h收取细胞,RT-PCR检测TSLPR和IL-7Rα的mRNA表达;于刺激后12、24、48 h收取细胞,免疫印迹法检测TSLPR、p-STAT5和STAT5的蛋白表达.中和性抗体封闭TSLPR受体后,烟曲霉菌刺激细胞24h,免疫印迹法检测p-STAT5和STAT5的蛋白表达.组间均数的比较采用单因素方差分析,均数间的多重比较采用LSD-t检验;组间均数的两两比较采用独立样本个t检验.结果 免疫荧光显示,THSF可见绿色荧光,正常THSF表达TSLPR;人重组TSLP蛋白刺激细胞后,免疫印迹法显示p-STAT5增多,至30 min时达峰(烟曲霉菌组:8.87±0.75;对照组:1.00±0.14),差异有统计学意义(P＜0.0l).烟曲霉菌刺激细胞后3、6、12、24h TSLPR mRNA (0.000 50±0.000 07、0.001 20±0.000 11、0.002 30±0.000 25、0.001 70±0.000 17)较对照组(0.000 20±0.000 03、0.000 20±0.000 05、0.000 20±0.000 03、0.000 20±0.000 04)表达增多,差异均有统计学意义(t=-9.955,-17.329,-16.735,-18.214;P＜0.01);IL-7RαmRNA的表达无明显变化(t=-0.684,-0.029,-0.319,-1.034;P＞0.05).免疫印迹法检测结果显示,烟曲霉菌刺激后24 h p-STAT5和TSLPR的表达较对照组明显增多(p-STAT5:9.46±2.08,1.00±0.06;TSLPR:l.80±0.27,1.00±0.34),差异有统计学意义(t=-7.055,-3.170,P＜0.01).中和性抗体封闭TSLPR受体后,p-STAT5的表达减少(anti-TSLPR-烟曲霉菌:0.55±0.20;CTR Ab-烟曲霉菌:1.00±0.08),差异有统计学意义(t=3.506,P＜0.05).结论 TSLP/TSLPR/STAT5信号通路在角膜基质细胞抗烟曲霉菌感染中发挥重要作用.

关键词：曲霉菌病、烟曲霉菌、角膜基质细胞、受体,细胞因子、STAT5转录因子、体外研究

所属期刊栏目：52

资助基金：国家自然科学基金81470604 National Natural Science Foundation of China81470604

在线出版日期：2016-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：206-211