骨髓间充质干细胞复合组织工程支架植入兔角膜板层的可行性研究

摘要：

目的 初步评估小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)复合组织工程支架复合体植入兔角膜板层的可行性,并探讨其对加固人工角膜与宿主界面减少其并发症的效果.方法 实验研究.体外:将红色荧光蛋白标记的小鼠BMSC体外复合于细胞外基质(ECM)支架(去细胞猪关节软骨ECM组织工程支架),4周及8周在荧光显微镜下观察其细胞存活状况,选用甲苯胺蓝染色法观察支架的细胞分布,及扫描电镜观察支架孔隙结构和附着细胞的情况.体内:将小鼠BMSC-支架复合体植入8只兔眼的角膜板层口袋,对侧眼作为对照植入无细胞的支架材料,植入后分别于2、4、8周取材,光镜下观察其组织病理学特点(HE染色),荧光显微镜下观察其细胞存活状况,使用活体成像仪观察8周时角膜内细胞存活状态;记录所有实验动物的眼前节状态.结果 扫描电镜观察ECM支架可见多孔隙结构,能够满足细胞及组织黏附及生长,甲苯胺蓝染色可见复合ECM后,支架可见细胞分布.免疫荧光显微镜下观察,红色荧光蛋白(RFP)标记后的小鼠BMSC体外复合ECM支架后,体外及角膜层间,细胞均呈增生性生长(最长观察时间8周).光镜下观察,与左眼相比,术后2、4、8周角膜基质层细胞数量逐渐增加,可见浅基质层有少量单核细胞和小鼠BMSC,胶原略变稀疏,排列整齐,无新生血管生成,所有兔角膜上皮完整,基本维持单核柱状上皮细胞形态;ECM支架形态难以辨认,和胶原呈融合生长.活体成像仪观察到小鼠BMSC-支架复合体植入兔角膜板层后8周,小鼠BMSC细胞处于存活状态.所有兔眼植入细胞-支架后,整个术后炎症反应轻微,结膜充血不明显,无新生血管,植片周围角膜组织透明.1周后,炎症反应基本消失,角膜透明,可清晰看见基质层的支架,4周后支架变稀薄,8周时可观察到支架十分稀薄,角膜缘血管正常.结论 ECM支架能够满足作为BMSC生长及增生的支架,且组织相容性良好.小鼠BMSC能够在角膜板层内环境中生长及增生.

关键词：角膜、人工器官、假体植入、细胞外基质、间充质基质细胞、组织工程、组织相容性

所属期刊栏目：52

分类号：R541.4;R743;R654.2

在线出版日期：2016-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：192-197