15-脂氧合酶-1过表达抑制氧诱导小鼠视网膜新生血管的机制研究

摘要：

目的 探讨15-脂氧合酶-1(15-LOX-1)过表达抑制氧诱导小鼠视网膜新生血管的作用及其机制.方法 实验研究.将88只7日龄C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、诱导模型组、基因治疗组和空白载体组,每组22只.将小鼠与哺乳母鼠共同置于氧浓度为75％±2％的氧箱内饲养5d后转移至正常氧环境中饲养5d,建立氧诱导视网膜病变(OIR)模型.小鼠出生后第12天,基因治疗组玻璃体腔注射Ad-15-LOX-1-EGFP 1.0μl;空白载体组注射等量Ad-EGFP.注射后第5天行实时荧光定量PCR和免疫印迹法分别检测视网膜15-LOX-1、过氧化物酶增殖活化受体Y(PPAR-γ)、血管内皮生长因子-A(VEGF-A)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)的mRNA和蛋白表达;行FITC-dextran荧光素造影视网膜铺片观察并测量视网膜无灌注区和新生血管的相对面积;行石蜡切片HE染色计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目.分别采用秩和检验和单因素方差分析进行组间数据的比较.结果 基因治疗组15-LOX-1和PPAR-γ mRNA及蛋白表达水平(15-LOX-1:2.17±0.25,1.45 ±0.10; PPAR-γ:2.12 ±0.29,0.85 ±0.03)明显高于诱导模型组(15-LOX-1∶0.62 ±0.03,0.66 ±0.04;PPAR-γ:0.67 ±0.18,0.48 ±0.03)和空白载体组(15-LOX-1∶0.51 ±0.14,0.57 ±0.03;PPAR-γ:1.07±0.09,0.52±0.02)(t15-LOX-1=12.511、13.402,P值均＜0.01;tPPAR-r =9.420、6.813,P值均＜0.01);与之相反,基因治疗组VEGF-A和VEGFR-2 mRNA及蛋白表达水平(VEGF-A∶0.87±0.07,0.34 ±0.01;VEGFR-2∶1.02±0.12,0.45 ±0.03)明显低于诱导模型组(VEGF-A:3.49±0.53,0.74±0.04;VEGFR-2∶2.28±0.44,0.82±0.01)和空白载体组(VEGF-A∶2.30±0.25,0.69±0.02;VEGFR-2:1.88±0.16,0.76±0.03)(tVEGF-A=10.662、5.843,P值均＜0.01; tVEGFR-2=6.731、4.763,P值均＜0.01).基因治疗组中视网膜无灌注区(5.88 ± 1.12)和新生血管面积(9.37±1.85)均较诱导模型组(21.25 ±2.87;24.13 ±4.29)和空白载体组(19.50±1.78;23.13 ±3.52)显著减小(t=9.404～17.312,P值均＜0.01);基因治疗组中突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目(1.25±0.89)与诱导模型组(60.63±10.82)和空白载体组(54.63 ±7.63)比较亦明显减少(Nemenyi检验:P值均＜0.01).结论 15-LOX-1过表达通过上调PPAR-γ,下调VEGF-A和VEGFR-2的表达发挥抑制氧诱导小鼠视网膜新生血管的作用.

关键词：视网膜新生血管化、花生四烯酸盐15-脂氧合酶、PPARγ、血管内皮生长因子A、血管内皮生长因子受体2

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分类号：R774.1;R392.11;R587.2

资助基金：国家自然科学基金81000393

在线出版日期：2014-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1111-1117