氯通道阻断剂对bFGF作用下人晶状体上皮细胞增殖的影响

摘要：

目的 观察氯通道阻断剂5-硝基-2(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)和二异硫氰基芪-2,2”-二磺酸(DIDS)对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的人永生系晶状体上皮细胞(HLE) B-3增殖的影响.方法 实验研究.取对数生长期的HLE B-3细胞为研究对象,用10 μg/L bFGF作用的细胞作为bFGF组,常规培养的细胞作为空白对照组,NPPB(50、100、150 μmol/L)及DIDS(10、50、100 μmol/L)分别加入含bFGF的HLE B-3细胞的培养液中共同作用24 h、48 h及72 h,采用CCK-8法、免疫细胞化学法及PI单染流式细胞术检测细胞增殖率、细胞增殖核抗原Ki-67蛋白的表达率及细胞周期的变化,进而观察氯通道阻断剂对其影响.不同浓度的NPPB和DIDS在三个时间段作用后A值差异比较采用双因素方差分析,组内各因素的多重比较采用LSD-t检验.各组细胞Ki-67表达情况及细胞周期构成比均采用单因素方差分析,组间多重比较采用LSD-t检验,空白对照组与bFGF处理组的两样本比较采用t检验.结果 CCK-8检测表明10 μg/L bFGF对HLE B-3细胞具有促增殖作用,24 h、48 h及72 h的增殖率分别为(18.77±6.53)％、(92.15±8.38)％和(37.09 ±2.89)％.不同浓度NPPB和DIDS在3个时间段内作用细胞后A值的变化表现出剂量及时间依赖性(bFGF+NPPB组:F时间=305.28,F浓度=18.76,P=0.000; bFGF+ DIDS组:F时间=94.43,F浓度=24.41,P=0.000),其中在作用48 h及72 h后,与bFGF处理组比较,各浓度的NPPB和DIDS均使得细胞A值有着明显的下降(P＜0.05).不同浓度的NPPB和DIDS作用于细胞48 h后,细胞内Ki-67蛋白表达细胞数有不同程度下降,差异存在统计学意义(bFGF+ NPPB组:F=580.32,P=0.000;bFGF+ DIDS组:F =507.43,P=0.000),其中150 μmol/L NPPB组和100 μmol/L DIDS组Ki-67的阳性细胞率分别下降至(18.32±1.23)％和(11.21±1.02)％,与bFGF处理组相比较,差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.01).药物作用48 h后PI染色流式细胞周期检测结果,bFGF组G0/G1期及S期细胞比例分别为(45.35±1.00)％和(31.51±1.04)％,150 μmol/L NPPB组G0/G1期细胞比例升高至(66.53±1.28)％,S期减少至(15.49±1.31)％,100 μmol/L DIDS组G0/G1期细胞比例分别升高至(67.37±0.63)％,S期减少至(13.88±0.53)％,与bFGF组相比差异均存在统计学意义(F=390.75,P=0.000;F=166.24,P=0.000).结论 NPPB和DIDS能够抑制bFGF诱导的HLE B-3细胞增殖,并在G1/S期限制点抑制其进入S期.

关键词：晶体、上皮细胞、细胞增殖、氯化物通道、4,4”-二异硫氰基苯-2,2”-二磺酸

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在线出版日期：2013-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1014-1019