白细胞介素-2与白细胞介素-23对小鼠类结合蛋白特异性T细胞向Th1、Th17分化的诱导及致病性研究

摘要：

目的 探讨外源性白细胞介素(IL)-2和IL-23对小鼠类结合蛋白(IRBP)特异性T细胞向辅助性T细胞(Th)1、Th17分化的诱导及致病性的研究.方法 实验研究.向30只雌性C57BL/6小鼠(6～8周)皮下注射200 μl含200μg人IRBP 1～20和0.8 mg结核分枝杆菌的乳糜液,建立实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)动物模型.在免疫后第13天取出小鼠脾脏和引流淋巴结,预留部分脾脏通过逆转录(RT)-PCR法检测其中干扰素(IFN)-γ mRNA与IL-17 mRNA的表达水平,作为正常对照组.其余脾脏在纱网研磨后用尼龙毛富集的方法提取小鼠T细胞,将其分为IL-2组和IL-23组,均加入抗原递呈细胞和IRBP 1～20,分别加入外源性小鼠重组IL-2与IL-23.在培养后第2天用Ficoll密度梯度离心方法分离T细胞,RT-PCR法检测T细胞中IFN-γmRNA与IL-17 mRNA的表达情况,同时取T细胞上清液用酶联免疫吸附试验检测上清中IFN-γ与IL-17的含量.继续培养到第4天,利用流式细胞仪检测不同干预条件下IL-17+γδ+T细胞的比例.取30只小鼠建立EAU模型后,取出T细胞,按照以上方法建立IL-2组和IL-23组IRBP特异性T细胞.另取6只小鼠随机分为两组,分别腹腔内注射IL-2组与IL-23组的T细胞,剂量为3.5×106个/只.在注射后第3、7、14天通过间接眼底镜观察小鼠的眼部发病情况,在第21天处死小鼠取出小鼠眼球做病理切片,观察IL-2组和IL-23组小鼠眼部病理变化.分别采用秩和检验、单因素方差分析和配对t检验对实验数据进行统计分析.结果 在抗原和外源性IL刺激后第2天,T细胞出现明显的“玫瑰花环”现象.RT-PCR检测结果显示,IL-2组中IFN-γmRNA的表达水平(0.26±0.02)明显高于正常对照组(0.12 ±0.05)和IL-23组(0.10±0.00) (F=80.51,P=0.003).IL-2组T细胞上清中IFN-γ的含量”(13 124.67±107.73)μg/L”高于IL-23组”(3953.67±117.34)μg/L”(t=169.61,P=0.000),而IL-17的含量”(588.67±77.43)μg/L”低于IL-23组”(5038.33 ±88.00)μg/L”(t=-361.71,P=0.000).流式细胞仪检测结果显示,IL-23组中分泌IL-17的γyδT细胞的比例为(9.93±0.55)％,高于IL-2组的(3.23±0.28)％(t=-33.18,P=0.001).IL-2组和IL-23组小鼠在过继性转移免疫后第3天均未出现炎症反应,在第14天时两组小鼠炎症反应最重,IL-23组可见大量炎症细胞浸润、视网膜出血和视网膜脱离,明显重于IL-2组.结论 IL-23对抗原特异性T细胞向Th17细胞分化具有促进作用,其中Th17细胞又以γδT细胞为主,而IL-2对其却具有抑制作用.进一步的研究证实,IRBP特异性Th17细胞的致病性明显高于Th1细胞.

关键词：自身免疫疾病、葡萄膜炎、白细胞介素2、白细胞介素23、眼蛋白质类

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资助基金：国家自然科学基金81072961,81100658;山东省自然科学基金ZR2010HM048

在线出版日期：2013-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：224-229