构建睫状神经营养因子绿色荧光蛋白融合表达载体电穿孔转染雪旺细胞的研究

摘要：

目的 构建睫状神经营养因子-绿色荧光蛋白(CNTF-GFP)融合表达质粒,以电穿孔法辅助转染培养的雪旺细胞,为优化细胞移植、促进视神经再生提供效果更好且便于观察的方法.方法 实验研究.构建重组质粒pcDNA3.1/CNTF-GFP;经测序鉴定后,电穿孔法辅助转染培养的雪旺细胞;荧光显微镜下动态观察转染效果,流式细胞计数;转染24 h后,用RT-PCR及免疫组化法检测基因转染及蛋白表达情况.结果 重组质粒经测序鉴定无误;在3 h即可见部分荧光,12 h逐渐增多,24～72 h到达高峰,持续至7 d仍有表达;流式细胞计数得转染率为44.93%±12.92%,转染24 h后,RT-PCR示目的 基因有较高转录,免疫组化示有CNTF蛋白的高表达,并与GFP蛋白表达部位完全重合.结论 成功构建了CNTF-GFP融合表达质粒;电穿孔法转染雪旺细胞后,表达良好,为制备转基因的种子细胞从而促进视神经再生的研究奠定了基础.

关键词：睫状神经营养因子、绿色荧光蛋白质类、视神经、神经再生、电穿孔

所属期刊栏目：45

分类号：R77(眼科学)

资助基金：国家自然科学基金30300379;上海市自然科学基金034119807;国家重点基础研究发展规划973计划2007CB512204;教育部新世纪优秀人才支持计划NCET-05-0370;复旦大学脑科学研究院开放研究课题基金

在线出版日期：2009-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：544-549