葛根素对培养的晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用

摘要：

目的 探讨过氧亚硝基阴离子(ONOO-)对培养的兔晶状体上皮细胞(LEC)造成的影响以及葛根素(Pur)的对抗作用.方法 为实验研究.原代培养兔LEC,将其第3或第4代用作实验.实验分为:(1)对照组:加入无热源生理盐水200 μl.(2)ONOO-组:加入ONOO-200 μl使之终浓度为0.5 mmol/L.(3)Pur组:同时加入5 μg/ml ONOO- 和10μg/ml的Pur.各组加入试剂总容积为200 μl,继续培养24 h.收集细胞分别用免疫荧光技术检测ONOO-的标记物硝基酪氨酸(NT)在LEC中的抗原表达变化;免疫印迹法检测晶状体组织中NT蛋白表达变化;光学显微镜观察细胞形态;基因组DNA电泳、流式细胞仪和Fas/FasL免疫组织化学染色检测细胞凋亡.采用单因素方差分析和q检验对数据进行分析.结果 实验6～24 h期间,对照组LEC呈现绿色荧光;ONOO-组:LEC颜色逐渐由黄绿色转变为橘黄色荧光;Pur组LEC颜色逐渐由淡绿色转变为淡黄色和淡黄绿色荧光;对照组NT蛋白质表达极微弱;ONOO-组:实验各期均有NT蛋白质表达,且呈由弱到强的趋势(A值为77.22±2.44,145.00±3.94,235.78±5.97).Pur组实验6 h表达微弱(A值为72.78±2.64),12 h表达增强(A值为84.94±3.01),但至24 h表达强度减弱(A值为74.44±3.00);计算机图像分析表明,实验6、12及24 h,3组NT蛋白质平均表达水平比较,差异有统计学意义.对照组细胞形态和基因组DNA电泳正常,流式细胞仪检查可见极轻微凋亡,但细胞膜和细胞浆均未见Fas/Fas L的表达;ONOO-组出现了明显的细胞形态改变,基因组DNA电泳可见典型的"梯形条带",随时间延长细胞凋亡逐渐加重(q=78.12,82.76,69.98,P＜0.01)并可见Fas/Fas L的表达;而Pur组细胞形态、基因组DNA电泳以及流式细胞仪检查大致正常,未见Fas/Fas L的表达.结论 葛根素可减轻ONOO-所致培养的LEC凋亡.Fas/Fas L信号转导途径可能影响并加强了ONOO-介导的LEC的凋亡过程.

关键词：晶体、上皮细胞、过氧亚硝基酸、葛根素、细胞、培养的

所属期刊栏目：44

分类号：R2(中国医学)

在线出版日期：2008-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：163-169