shRNA抑制缺氧条件下人视网膜色素上皮细胞低氧诱导因子-1α基因对血管内皮生长因子表达的影响

摘要：

目的 探讨缺氧条件下人视网膜色素上皮(hRPE)细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 利用体外转录法合成针对HIF-1α mRNA序列的靶点之一的小发卡环RNA(shRNA),以化学低氧诱导剂CoCl2模拟RPE细胞缺氧环境,对缺氧培养条件下hRPE细胞的HIF-1α进行RNA干扰,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HIF-1α和VEGFmRNA的表达,免疫印迹法检测HIF-1α和VEGF蛋白水平,以正常组、缺氧组及阴性转染组作为对照,观察其对HIF-1α基因的沉默效果及对VEGF表达的抑制作用.结果 转染HIF-1α mRNA的特异性shRNA后,RT-PCR检测结果显示缺氧条件下hRPE细胞HIF-1α基因沉默效果为77.1%,VEGFmRNA的表达水平下降了27.8%;免疫印迹法检测结果显示HIF-1α和VEGF蛋白水平显著降低.结论 针对HIF-1α mRNA的shRNA能有效地使HIF-1α基因沉默,进而抑制缺氧对VEGF的上调作用.

关键词：RNA、小分子干扰、核蛋白质类、DNA结合蛋白质类、血管内皮生长因子A、缺氧、色素上皮、眼

所属期刊栏目：43

分类号：R77(眼科学)

资助基金：湖北省自然科学基金2006ABA157

在线出版日期：2007-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1022-1027