蛋白激酶Cα在小鼠胚胎干细胞定向分化中对发育基因表达的调控作用

摘要：

目的探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对小鼠胚胎干细胞(ESCs)定向诱导分化中发育基因(pax-6、slit-2、netrin-1)表达的影响.方法 ES-BALB/c细胞株用无白血病抑制因子(mLIF)的ESCs培养液培养4 d,形成胚胎体(EBs),再分别种植于预置有盖玻片的6孔板和直径100 mm的培养皿,经5×10-7 mol/L视黄酸 (RA)诱导后,用神经细胞特异性抗原NSE和NF-200来鉴定分化细胞的类型,在诱导后1、3、5、7及14 d用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定细胞的PKCα和发育基因的mRNA表达情况 ,并观察了PKC激活剂佛波酯(PMA)和PKC抑制剂D-鞘氨醇对它们表达的影响.结果免疫组化发现在诱导后第3 d大多数细胞NSE和NF-200染色阳性,RT-PCR 证实诱导后1 d PKCα、pax-6和netrin-1的mRNA表达急剧下降,3～7 d逐渐升高,至14 d恢复至正常水平,而slit-2在诱导前后均无明显表达.PMA可使PKCα、 pax-6、netrin-1 的mRNA水平在诱导后细胞中的表达明显增强,而D-鞘氨醇的作用相反, 使它们的表达显著降低,而对slit-2无明显影响.结论发育基因pax-6和netrin-1在ESCs定向分化为神经样细胞中有重要的调控作用,可能是通过PKCα信号通路起作用.(中华眼科杂志,2005,41:123-127)

关键词：胚胎、干细胞、蛋白激酶C、细胞分化、基因表达调控、发育期、小鼠

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分类号：R32;S85

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划G1999054301;国家高技术研究发展计划863计划2003AA205005;国家自然科学基金30171001,30200306;广东省科技攻关项目2003A3020401;广东省科技攻关项目2003C32715;广东省教育厅重点实验室基金

在线出版日期：2005-03-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：123-127