外源性细胞周期蛋白激酶抑制因子p21基因对人晶状体上皮细胞周期的影响

摘要：

目的研究细胞周期蛋白激酶抑制因子p21基因转染对人晶状体上皮细胞(lens epithelial cells, LEC)周期调控的影响,在基因水平探讨防治后发性白内障的可能性.方法构建含人p21基因真核表达的载体质粒pcDNA3/p21, 采用基因转染技术将质粒DNA转染至永生性人LEC系HLE-B3,使用流式细胞仪观察细胞生长和周期的变化,并采用逆转录聚合酶链式反应方法检测p21 mRNA的表达;分别采用免疫组化和免疫印迹(western blotting,WB)方法检测p21蛋白的表达.结果体外构建的载体质粒pcDNA3/p21经酶切鉴定含有人p21基因全长cDNA片段.基因转染后细胞HLE-B3经传代培养,48 h后出现缓慢生长且部分细胞漂浮死亡的现象,G1期细胞明显增多.与对照细胞比较,转染后细胞的p21 mRNA表达明显增多;p21蛋白表达明显增强,在经筛选的阳性克隆细胞中WB方法可检测到相对分子质量为21 000的阳性蛋白带.结论外源性p21基因可在人LEC系HLE-B3中过度表达,并对细胞周期调控产生抑制作用.基因转染抑制LEC增殖可能成为防治后发性白内障的新途径.

关键词：细胞周期、细胞周期蛋白类、转染、上皮细胞、晶体

所属期刊栏目：39

分类号：R77(眼科学)

资助基金：国家自然科学基金39870803,39970781;国家"211"工程建设项目98012

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：209-214