肠炎沙门菌 spvD基因缺失与回补株的构建及其对Caco-2细胞毒力的研究

摘要：

目的:探讨肠炎沙门菌
spvD基因对人克隆结肠腺癌Caco-2细胞侵袭力及胞内增殖力的影响。
方法:利用自杀质粒介导的同源重组技术构建
spvD基因缺失株，PCR扩增并克隆
spvD基因于pBAD33表达载体获得回补质粒，导入相应缺失株得到回补株，并将pBAD33导入野生株及缺失株作为空载对照。荧光定量反转录聚合酶链式反应检测
spvD mRNA表达水平。以Caco-2细胞作为体外模拟人肠上皮细胞模型，分别将野生株、缺失株及回补株与其共培养，探究
spvD基因对Caco-2细胞的毒力。使用LSD-
t检验进行3组间
spvD mRNA表达水平比较及胞内活菌数比较，使用χ2检验进行3组间侵袭率的比较。
结果:以野生株
spvD mRNA表达量作为单位“1”，缺失株为“0.00”、回补株为“2.60”（LSD-
t野生株，缺失株=1.11，
P=0.31；LSD-
t野生株，回补株=-1.77，
P=0.13；LSD-
t缺失株，回补株=-2.88，
P=0.03），该结果证实了缺失株及回补株的成功构建。上述3组肠炎沙门菌对Caco-2细胞的侵袭实验结果显示，野生株侵袭率为0.23%，缺失株侵袭率为0.16%，回补株侵袭率为0.16%，差异无统计学意义（χ
2=1.13，
P=0.570）。通过比较细菌干预Caco-2细胞后不同时间点胞内活菌数，发现在干预16 h时，野生株（6.50×10
6 CFU/ml）、回补株（7.25×10
6 CFU/ml）胞内活菌数明显增多，均高于缺失株（1.90×10
6 CFU/ml）（LSD-
t野生株，缺失株=7.95，
P=0.00；LSD-
t野生株，回补株=-1.27，
P=0.25；LSD-
t缺失株，回补株=-9.22，
P=0.00）。
结论:尚不能认为
spvD基因影响肠炎沙门菌对Caco-2细胞的侵袭力，但该基因可促进肠炎沙门菌在Caco-2细胞内增殖。

关键词：肠炎沙门菌、基因敲除、毒力质粒、侵袭力

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资助基金：国家自然科学基金82002206;National Natural Science Foundation of China82002206

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：486-493