亚砷酸钠对人肝星状细胞活化及细胞外基质分泌的影响

摘要：

目的 探讨不同浓度亚砷酸钠(NaAsO2)暴露对人肝星状细胞活化及主要细胞外基质(ECM)分泌的影响.方法 采用不同浓度NaAsO2(0.0、0.1、1.0、10.0、50.0、100.0μmol/L)处理体外培养的人肝星状细胞株(Lx-2)24、48、72 h后,采用细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,计算半数抑制浓度(IC50);根据IC50结果,采用0.000、1.875、3.750、7.500、15.000μmol/L NaAsO2处理Lx-2细胞24 h,另以7.500μmol/L NaAsO2处理Lx-2细胞0、12、24、48、72 h,到达处理终点收集细胞沉淀及培养上清.采用Western blot法检测Lx-2细胞活化相关蛋白表达水平,包括α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子-β1(TGF-β1);ELISA法检测培养上清主要用于ECM分泌水平,包括透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(COL-IV)、Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP).结果 随NaAsO2处理浓度的增加,Lx-2细胞存活率逐渐下降,其中50.0、100.0μmol/L砷暴露组在24、48和72 h时,细胞存活率较0.0μmol/L组均明显降低(P<0.05);处理24、48、72 h的IC50分别为72.75、48.19和29.95μmol/L.肝星状细胞活化相关蛋白检测结果发现,1.875、3.750、7.500、15.000μmol/L NaAsO2处理Lx-2细胞24 h后,α-SMA和TGF-β1蛋白表达水平均高于0.000μmol/L,且在7.500μmol/L剂量组蛋白表达差异最大(P<0.05).7.500μmol/L NaAsO2处理Lx-2细胞0、12、24、48、72 h后,α-SMA和TGF-β1蛋白表达水平亦随染毒时间的增加而升高(P<0.05).ECM分泌水平检测显示,1.875、3.750、7.500、15.000μmol/L NaAsO2处理24 h后,HA、LN、COL-Ⅳ和PⅢNP分泌水平均高于0.000μmol/L组(P<0.05).7.500μmol/L NaAsO2处理Lx-2细胞0、12、24、48、72 h后,HA、LN、COL-Ⅳ和PⅢNP分泌水平均高于对照组(P<0.05).结论 NaAsO2可上调肝星状细胞活化相关蛋白表达,诱导其进一步活化,进而增加细胞外基质分泌水平.

关键词：细胞外基质、肝、肝纤维化、亚砷酸钠、肝星状细胞

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资助基金：国家自然科学基金81430077、81660525;贵州医科大学博士科研启动基金YJ2016-9;National Natural Science Foundation of China81430077, 81660525;Scientific Research Staring Foundation for Doctor, Guizhou Medical UniversityYJ2016-9

在线出版日期：2018-11-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：983-987