人尿液中8-羟基脱氧鸟苷的超高效液相色谱-串联质谱联用检测方法

摘要：

目的：建立尿液中8?羟基脱氧鸟苷（8?OHdG）的超高效液相色谱?串联质谱快速检测方法。方法配制浓度为0.01~0.1μg/ml的8?OHdG标准溶液，以7μl/min的速度导入离子源，找出母离子、子离子质荷比，逐步优化每个离子对的解簇电压、碰撞电压和出口电压等质谱参数。以浓度为10.0μg/L的加标尿液做样品，分别用1 mol/L甲酸铵溶液和甲酸体积比为5∶1、4∶1、3∶1、2∶1和1∶1的甲酸?甲酸铵溶液调节样品pH值。分别选用HLB、MCX、MAX 3种不同极性的固相萃取柱进行测试。分别测试甲醇和水比例为90∶10、80∶20、50∶50、20∶80、10∶90的洗脱效果，测试乙腈和水比例为90∶10、80∶20、50∶50、20∶80、10∶90的洗脱效果。以标准系列应用液浓度对应化合物定量离子对峰面积的比值绘制标准曲线。以响应值为3倍信噪比对应的8?OHdG浓度计为检出限，以响应值为10倍信噪比对应的8?OHdG浓度计为定量下限。采用空白尿液加标回收的方式来评价精密度和加标回收率。结果母离子质荷比为284.1，子离子质荷比分别为168.1、140.1、123.0、112.0，定量离子对284.1/168.1的碰撞电压为18 V，284.1/140.1碰撞电压为42 V，284.1/123.0碰撞电压为48 V，284.1/112.0碰撞电压为53 V。由10 ml 1 mol/L甲酸铵溶液、2 ml甲酸、88 ml水混合溶液与样品体积1∶5的比例进行pH调节的方式回收率最高，为87.9%～104.3%。用3 ml甲醇和3 ml水活化的HLB柱进行样品提取净化，用1.0 ml甲醇进行洗脱的方式回收率最高，为87.9%～104.3%。在1.0~100.0μg/L的浓度范围内，8?OHdG标准应用液检测结果呈良好的线性关系。回归方程y=1.25x+0.74，相关系数r=0.9995。方法的检出限是0.2μg/L，定量下限是0.7μg/L。方法加标回收率范围在87.9%～104.3%，批内精密度在1.5%～3.7%范围内，批间精密度在1.6%～5.4%范围内。结论本研究建立的方法灵敏度高，精密度和准确度好，检测浓度范围较宽。

关键词：脱氧鸟苷、尿、色谱法、超高效液相、氧化损伤、生物标志物

所属期刊栏目：50

分类号：O65;TQ4

资助基金：国家自然科学基金81172642；国家科技支撑计划2014BAI12B02

在线出版日期：2016-06-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：357-361