α-生育酚对亚硝胺诱导人食管上皮细胞癌变早期NFκB和Nrf2信号通路的调节作用

摘要：

目的 研究α-生育酚(α-tocopherol,α-T)对亚硝胺诱导人食管上皮细胞癌变早期NFκB和Nrf2信号通路的调节作用.方法 采用N-甲基苄基亚硝胺(N-nitrosomethylbenzylamine,NMBzA)染毒人正常食管上皮细胞(HET-1A)模拟食管癌变启动,染毒浓度为50、100 μmol/L,染毒时间为24 h.α-T干预组细胞在染毒前3h加入25、50、100 μmol/L的α-T进行预处理,然后与100 μmol/L NMBzA共同孵育24 h;人食管鳞癌细胞(EC109)细胞采用相同浓度的α-T进行处理并与HET-1A进行对比;以体积分数为0.1％二甲基亚砜(DMSO)处理组细胞作为对照组.采用细胞免疫荧光试验分析NFκB p65和Nrf2在细胞内的分布和活化状态,采用RT-PCR或Western blot法检测细胞周期素D1 (cyclinD1)、核蛋白KI67(KI67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、环氧化酶2(COX2)、5脂氧合酶(5LOX)、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶(NQO1)、谷胺酸半胱氨酸连接酶(GCLC)等相关靶基因表达水平,采用流式细胞术检测细胞内活性氧水平.结果 HET-1A细胞经100 μmol/L NMBzA染毒后,CyclinD1、KI67、PCNA基因表达水平分别为2.99±0.15、2.35±0.38、2.46±0.25,均高于对照组(1.00±0.08)(F值分别为97.23、65.28、34.62,P值均＜0.001);与对照组(0)相比,NFκB p65 (71.0％,98/138)和Nrf2(36.3％,49/135)在细胞核内的分布比例增加(x2值分别为194.71、133.72,P值均＜0.001).与对照组(1.00±0.05)相比,HET-1A靶基因COX2 (3.22±0.17)、5LOX (2.87±0.12)和HO-1 (1.87±0.22)、NQO1 (2.14±0.08)、GCLC(2.63±0.41)蛋白表达水平均升高(F值分别为72.35、43.87、69.23、71.34、85.79,P值分别为0.013、0.015、0.010、0.011、0.002).50 μmol/Lα-T干预处理后,与100 μmol/L NMBzA组(71.0％,98/138)相比,NFκB p65在核内分布(7.7％,8/104)减少(x2=148.10,P＜0.001),其靶基因COX2 (0.74±0.19)、5LOX (0.42±0.13)蛋白表达水平降低(F值分别为56.31、73.25,P值分别为0.003、0.001);而Nrf2信号通路相关指标未出现改变(P值均＞0.05);α-T对EC109细胞中NFκB和Nrf2信号通路均无影响(P值均＞0.05).结论 在NMBzA诱发食管癌早期,α-T能够通过阻断NFκB信号通路的激活从而抑制癌变启动,可能是α-T对食管癌潜在预防作用的主要机制;食管癌发病过程中,细胞可能因Nrf2信号通路的激活而获得了适应氧化应激的能力.

关键词：α生育酚、食管肿瘤、NFκB、Nrf2、活性氧自由基

所属期刊栏目：49

分类号：R735.1;R318;R15

资助基金：国家自然科学基金;国家食品安全风险评估中心青年科研基金项目

在线出版日期：2015-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：546-553