蛋白磷酸酶2A B56β全酶调控氯化镉诱导肝细胞毒性的作用研究

摘要：

目的：探讨蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A, PP2A）B56β全酶调控CdCl2诱导肝细胞毒性的作用及其机制。方法采用改良四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测CdCl2对人正常肝细胞（L-02）、黄曲霉素诱导转化细胞（L-02 RT-AFB1）及肝肿瘤细胞（Bel7402）的毒性，利用病毒感染法在L-02或Bel7402上构建丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B（AKT）低表达(L-02 SHAKT)、B56β低表达(L-02 SHB56β)和B56β高表达(L-02 RT-AFB1-B56β、Bel7402-B56β)的细胞株。在浓度为0、20、40、80、160μmol/L的CdCl2处理下，检测人正常肝细胞、转化的肝细胞和肝肿瘤细胞的相对细胞活力。在2.5、5.0μmol/L的渥青霉素和40μmol/L CdCl2共同作用下检测L-02细胞中各蛋白相对表达量。采用Western blot法检测这些细胞株中B56β、金属硫蛋白（metallothionein，MT）、AKT、AKT磷酸化（P?AKT）的表达水平。结果在40μmol/L CdCl2作用下，L-02 RT-AFB1和Bel7402细胞中MT表达水平分别为0.12±0.02、0.06±0.06，低于对照组（0.92±0.14）（F=1148.16，P<0.001）。在40μmol/L CdCl2作用下，AKT干扰细胞株L-02 SHAKT-1、L-02 SHAKT-2中p-AKT水平分别为0.08±0.02、0.08±0.05，低于对照组（0.18±0.15）（F=724.70，P<0.001）；两种细胞MT的表达水平均为0.62±0.16，高于对照组（0.22±0.14）（F=94.73，P<0.001）。在2.5、5.0μmol/L渥青霉素和40μmol/L CdCl2共同作用下，L-02细胞中p-AKT的表达水平分别为0.28±0.07、0.15±0.11，低于未用渥青霉素处理组（0.52±0.11）（F=578.57，P<0.001）；MT的表达水平分别为1.62±0.80、1.08±0.15，高于未用渥青霉素处理组（0.69±0.18）（F=12.34，P<0.001）。在40μmol/L CdCl2作用下，B56β低表达细胞株L-02 SHB56β-1、L-02 SHB56β-2中p-AKT的表达水平分别为0.57±0.13、0.59±0.02，高于对照细胞L-02 SHGFP（0.32±0.02）（F=87.16，P<0.001）；MT的表达水平分别为0.35±0.07、0.20±0.03，低于对照细胞L-02 SHGFP（1.51±0.13）（F=2457.10，P<0.001）。在40μmol/L CdCl2作用下，B56β高表达细胞株L-02 RT-AFB1-B56β、Bel7402-B56β中p-AKT的表达水平分别为0.10±0.11、0.09±0.01，低于对照细胞L-02 RT-AFB1（0.36±0.01）、Bel7402（0.43±0.11）（F=877.62，P<0.001）；MT的表达水平分别为0.92±0.13、0.95±0.08，高于对照细胞L-02 RT-AFB1（0.44±0.12）、Bel7402（0.77±0.06）（F=51.97，P<0.001）。结论特异的PP2A B56β全酶介导AKT的去磷酸化调控MT的表达，最终影响重金属CdCl2诱导的肝细胞毒性。本研究揭示了一条PP2A参与CdCl2诱导肝细胞毒性的关键信号通路。

关键词：磷蛋白磷酸酶类、金属硫蛋白、细胞毒性

资助基金：国家自然科学基金31401213；广东省自然科学基金S2013020012725

在线出版日期：2015-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：429-435