CCM3基因缺陷对铅所致小鼠胚胎成纤维细胞遗传毒性影响的体外研究

摘要：

目的 探讨CCM3基因缺陷对醋酸铅所致小鼠胚胎成纤维细胞遗传毒性的影响.方法 将C57雌鼠与CCM3基因敲除小鼠杂合雄鼠合笼后,取孕13.5 d的胎鼠,原代分离培养胚胎成纤维细胞.基因分型后,野生型和CCM3基因缺陷型细胞分别给予6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00 μmol/L醋酸铅处理,用MTS法检测细胞活性,并根据实验结果,选择6.25、25.00、100.00 μmol/L醋酸铅染毒,用双核阻滞法检测遗传毒性,用Western blot法检测相关基因的蛋白表达情况.结果 小鼠胚胎成纤维细胞经醋酸铅处理24 h后,野生型细胞100.00 μmol/L醋酸铅处理组(69.16±1.36)与对照组(100.00±2.33)相比,细胞活性下降了30％,杂合型细胞100.00 μmol/L醋酸铅处理组(87.16±5.50)与对照组(100±2.06)相比,细胞活性下降了13％,差异有统计学意义(F野生型=98.59,F杂合型=82.63,P值均＜0.001).经醋酸铅处理48 h后,野生型细胞100.00 μmol/L醋酸铅处理组(51.99±5.62)与对照组(100.00±3.11)相比,细胞活性下降了50％,杂合型细胞100.00 μmol/L醋酸铅处理组(66.33±4.06)与对照组(100.00±5.72)相比,细胞活性下降了35％,差异均有统计学意义(F野生型=82.63,F杂合型=36.86,P值均＜0.001).双核微核实验结果显示,随着染毒剂量增加,两种基因型细胞的核分裂指数逐渐下降,双核细胞微核率呈逐渐升高趋势,野生型细胞对照组、6.25、25.00、100.00 μmol/L剂量组的双核微核细胞率分别为29.6 ±2.2、47.3±6.6、55.5±9.1、66.8±3.5(/1 000);杂合型细胞的双核微核细胞率则分别为35.3 ±5.6、50.0±8.3、57.0±8.5、58.8±2.1(/1000).Western blot结果显示,野生型细胞100.00 μmol/L醋酸铅处理组(0.70±0.03)的CCM3表达量是对照组(0.53±0.07)的1.32倍,杂合型细胞100.00 μmol/L醋酸铅处理组(0.48±0.02)的CCM3表达量是对照组(0.27±0.04)的1.77倍,缺陷型细胞升高较多,差异有统计学意义(F野生型=14.77,F杂合型=25.74,P值均＜0.001);野生型细胞100.00 μmol/L醋酸铅处理组(0.69±0.03)的γ-H2AX表达量是对照组(0.65±0.07)的1.06倍,杂合型细胞100.00 μmol/L醋酸铅处理组(0.99±0.04)的CCM3表达量是对照组(0.64±0.06)的1.55倍,差异有统计学意义(F野生型=7.08,P=0.012;F杂台型=13.49,P=0.002).结论 CCM3基因可能在铅所致小胚胎成纤维细胞的遗传毒性中发挥作用,在小鼠胚胎成纤维细胞毒性方面,铅暴露与CCM3基因存在交互作用.

关键词：铅、小鼠、CCM3基因、胚胎成纤维细胞、细胞毒性

所属期刊栏目：49

分类号：R994.6;R734.2;R322.81

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;引进人才科研启动基金

在线出版日期：2015-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：269-274