肠道病毒71型外壳蛋白VP2基因重组表达及活性鉴定

摘要：

目的 克隆表达肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白VP2,鉴定重组蛋白免疫活性,为EV71血清学检测试剂和疫苗研究提供依据.方法 利用PCR技术从EV71/Henan/106/2009河南分离株基因组扩增VP2基因,经酶切连接到表达载体pMAL-c2X中,转化大肠杆菌(E.coli TB1);用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因表达,并对重组蛋白进行纯化,SDS-PAGE和Western blotting方法对重组蛋白分析鉴定其免疫活性;建立ELISA检测EV71 IgM抗体方法,检测手足口病患儿急性期中和抗体阳性血清60份,其中阳性52份,阴性8份;检测临床诊断手足口病患儿急性期血清标本88份.结果 PCR方法扩增的VP2基因长度约为762 bp;经酶切鉴定插入到表达载体的基因片段与预期目的片段相一致;SDS-PAGE结果显示表达产物相对分子质量约为71 500;经大肠杆菌高效表达和纯化获得了重组蛋白EV71-VP2,通过Western blotting分析,该重组蛋白与手足口病患者血清反应产生特异杂交带;建立ELISA检测方法的灵敏度为87％,特异度为83％.在临床诊断的88份手足口病患儿急性期血清标本中,抗EV71-IgM阳性48份,阳性率为55％.结论 本研究成功克隆并构建了EV71 VP2基因高效原核表达系统,初步结果显示重组蛋白具有较好的抗原性,为EV71诊断试剂的研究奠定了基础.

关键词：手足口病、肠道病毒属、抗原、DNA、重组

所属期刊栏目：48

分类号：R377.5;Q786;S852.6

资助基金：河南省科技攻关计划;河南省医学科技攻关计划重大项目;河南省卫生科技创新型人才工程青年科技创新人才项目

在线出版日期：2014-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：324-327