多重实时PCR检测沙门菌、志贺菌和致泻性大肠埃希菌

摘要：

目的 建立多重实时荧光PCR检测沙门菌侵袭蛋白A基因(invA)、肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)不耐热肠毒素基因(elt)、志贺菌和肠侵袭性大肠埃希菌侵袭力基因(ipaH)的方法.方法 优化多重实时荧光PCR的反应条件,检测系列10倍稀释的阳性菌DNA提取物.90份腹泻患者粪便样品经缓冲蛋白胨水(buffered peptone water,BP)增菌6 h后进行多重实时荧光PCR检测,并对阳性标本进行菌株分离和鉴定.结果 多重实时PCR方法最低可以检测到10 CFU/μl的福氏2a F301株、102 CFU/μl的鼠伤寒沙门菌和ETEC 44815株.检测腹泻患者粪便样品,elt基因阳性率为14.4%(13/90),ipaH基因阳性率为5.6%(5/90);并从阳性样品中分离到3株elt基因阳性大肠埃希菌和4株ipaH基因阳性大肠埃希菌.整个检测过程可在10 h内完成,其中包括BP增菌6 h.结论 建立了同时检测invA、elt、ipaH毒力基因的多重实时荧光PCR方法,具有高度的特异性,可用于沙门菌、肠产毒性大肠埃希菌、志贺菌和肠侵袭性大肠埃希菌菌株的毒力基因鉴定及临床腹泻粪便标本的快速筛检.

关键词：聚合酶链反应、基因、沙门氏菌属、志贺氏菌属、大肠杆菌

所属期刊栏目：41

分类号：R3(基础医学)

资助基金：杭州市科技发展计划资助课题2003133B35

在线出版日期：2008-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：461-465