聚嘧啶束结合蛋白相关剪接子高表达对人视网膜微血管内皮细胞凋亡和内质网氧化应激损伤的保护作用

摘要：

目的:观察聚嘧啶束结合蛋白相关剪接因子（PSF）高表达对高浓度4-羟基壬烯醛（4-HNE）诱导下人视网膜微血管内皮细胞（hRMEC）内质网（ER）氧化应激损伤的保护作用。方法:体外培养的对数生长期hRMEC分为正常组、单纯4-HNE处理组（单纯4-HNE组），空载质粒联合4-HNE处理组（Vec+4-HNE组）、PSF高表达联合4-HNE处理组（PSF+ 4-HNE组）。单纯4-HNE组、Vec+4-HNE组、PSF+4-HNE组细胞培养基加入10 μmol/L 4-HNE，刺激12 h。其后，Vec+4-HNE组、PSF+4-HNE组应用转染试剂脂质体2000分别导入pcDNA空载体、pcDNA-PSF真核表达质粒，转染24 h。正常组细胞常规培养。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率；2'，7'-二氯二氢荧光素双乙酸盐探针检测各组细胞内活性氧（ROS）表达水平。蛋白质免疫印迹法检测各组细胞内ER氧化物蛋白1（Ero-1）、蛋白质二硫键异构酶（PDI）、C/EBP同源转录因子（CHOP）、葡萄糖调节蛋白（GRP）78、蛋白激酶R样ER激酶（pERK）/磷酸化pERK（p-pERK）、真核起始因子（eIF）2α/磷酸化eIF（peIF）、活化转录因子4（ATF4）蛋白相对表达量。组间比较行单因素方差分析。结果:单纯4-HNE组、Vec+4-HNE组、PSF+4-HNE组细胞凋亡率分别为（22.50±0.58）%、（26.93±0.55）%、（11.70±0.17）%；细胞内ROS表达量分别为0.23±0.03、1.60±0.06、0.50±0.06。三组间细胞凋亡率比较，差异有统计学意义（
F=24.531，
P<0.05）；Vec+4-HNE组ROS表达水平较单纯4-HNE组、PSF+4-HNE组显著升高，差异有统计学意义（
F=37.274，
P<0.05）。正常组、单纯4-HNE组、Vec+4-HNE组、PSF+4-HNE组细胞ER中Ero-1、PDI蛋白相对表达量分别为1.25±0.03、0.45±0.03、0.63±0.03、1.13±0.09和1.00±0.10、0.27±0.10、0.31±0.05、0.80±0.06；CHOP、GRP78蛋白相对表达量分别为0.55±0.06、1.13±0.09、0.90±0.06、0.48±0.04和0.48±0.04、1.25±0.03、1.03±0.09、0.50±0.06。4组Ero-1（
F=43.164）、PDI（
F=36.643）、CHOP（
F=42.855）、GRP78（
F=45.275）蛋白相对表达量比较，差异均有有统计学意义（
P<0.05）。4组细胞ER p-pERK/pERK（
F=35.755）、peIF2α/eIF（
F=38.643）、ATF4（
F=31.275）蛋白相对表达量比较，差异均有统计学意义（
P<0.05）。
结论:PSF可抑制高浓度4-HNE诱导的细胞凋亡及ROS产生；其作用机制与恢复ER稳态平衡及下调pERK/eIF2α/ATF4通路的活化水平密切相关。

关键词：聚嘧啶束结合蛋白相关剪接子、高浓度4-羟基壬烯醛、内质网、人视网膜血管内皮细胞、细胞实验

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资助基金：天津市高等教育委员会科技发展基金项目2022ZD057;Tianjin Higher Education Commission Science and Technology Development Fund Project2022ZD057

在线出版日期：2024-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：681-686