二甲双胍抑制糖尿病视网膜血管内皮细胞中核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白3炎症小体活化和细胞焦亡

摘要：

目的 观察二甲双胍(Met)对糖尿病(DM)微环境下人视网膜微血管内皮细胞(hRMEC)中核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体及细胞焦亡的影响.方法 实验研究,分为体内动物实验和体外细胞实验进行.体内动物实验:健康C57BL/6J雄性小鼠9只,随机分为DM组、正常对照组、DM+Met处理组(DM+Met组),每组各3只小鼠.DM组、DM+Met组小鼠经链脲佐菌素诱导建立DM模型;DM+Met组给予Met 400 mg/(kg·d)干预.建模后8周,免疫组织化学染色观察正常对照组、DM组、DM+Met组小鼠视网膜NLRP3、cleaved-膜穿孔蛋白D(GSDMD)、cleaved-半胱天冬酶1(Caspase-1)的表达.体外细胞实验:hRMEC分为常规培养细胞组(N组)、晚期糖基化终末产物(AGE)组、AGE+Met组.AGE组、AGE+Met组加入150 μg/ml AGE诱导细胞,AGE+Met组另加入2.0 mmol/L Met处理细胞.流式细胞仪检测各组细胞焦亡情况;2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针检测各组细胞中活性氧(ROS)表达;实时荧光定量聚合酶链反应、蛋白质免疫印迹法检测各组细胞中NLRP3、cleaved-GSDMD、cleaved-Caspase-1 mRNA、蛋白相对表达量.三组间比较采用单因素方差分析.结果 体内动物实验:与DM组比较,正常对照组、DM+Met组小鼠视网膜中NLRP3、cleaved-GSDMD、cleaved-Caspase-1表达显著降低;三组间比较,差异有统计学意义(F=43.478、36.643、24.464,P＜0.01).体外细胞实验:流式细胞仪检测结果显示,AGE组细胞焦亡率显著高于N组、AGE+Met组,差异有统计学意义(F=32.598,P＜0.01).DCFH-DA检测结果显示,N组、AGE+Met组细胞内ROS水平较AGE组明显降低,差异有统计学意义(F=47.267,P＜0.01).AGE+Met组细胞中NLRP3、cleaved-GSDMD、cleaved-Caspase-1 的mRNA(F=51.563、32.192、44.473,P＜0.01)和蛋白(F=63.372、54.463、48.412,P＜0.01)相对表达量较N组显著下降.结论 Met可下调hRMEC内NLRP3炎性小体相关因子表达并抑制细胞焦亡.

关键词：二甲双胍、视网膜血管内皮细胞、核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白3、炎性小体、细胞焦亡、动物实验、细胞实验

所属期刊栏目：39

分类号：R774.1;R587.2;R285

在线出版日期：2023-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：408-414