糖尿病小鼠视网膜p21活化激酶4表达上调及其对视网膜血管内皮细胞行为和线粒体功能的影响

摘要：

目的:观察p21活化激酶4（PAK4）对视网膜血管内皮细胞行为和线粒体功能的影响。方法:实验研究，分为体内动物实验和体外细胞实验两部分。体内动物实验：健康C57BL/6J雄性小鼠12只，随机分为正常对照组、糖尿病组，每组各6只小鼠。糖尿病组小鼠经链脲佐菌素诱导建立糖尿病模型。建模后8周，采用蛋白质免疫印迹法、实时荧光定量聚合酶链反应检测正常对照组、糖尿病组小鼠视网膜PAK4表达情况。体外细胞实验：人视网膜微血管内皮细胞（hRMEC）分为常规培养细胞组（N组）、空载体组（Vector组）、PAK4过表达组（PAK4组）。各组加入150 μg/ml糖基化终末产物诱导细胞。细胞划痕实验检测各组hRMEC内细胞迁移情况；流式细胞仪检测各组白细胞粘附于hRMEC数量。Seahorse XFe96细胞能量代谢分析仪测定细胞内线粒体基础呼吸、三磷酸腺苷（ATP）生成、最大呼吸与备用呼吸能力。两组间比较采用
t检验；三组间比较采用单因素方差分析。
结果:体内动物实验：与正常对照组小鼠比较，糖尿病组小鼠视网膜中PAK4 mRNA、蛋白相对表达量显著升高，差异均有统计学意义（
t=25.372、22.419、25.372，
P<0.05）。体外细胞实验：与N组、Vector组比较，PAK4组hRMEC中PAK4蛋白、mRNA相对表达量和细胞迁移率均显著升高，差异有统计学意义（
F=36.821、38.692、29.421，
P<0.05）。流式细胞仪检测结果显示，PAK4组hRMEC上白细胞粘附数量明显升高，差异有统计学意义（
F=39.649，
P<0.01）。线粒体压力测量结果显示，PAK4组hRMEC内线粒体基础呼吸、ATP生成、最大呼吸与备用呼吸能力明显减弱，差异有统计学意义（
F=27.472、22.315、31.147、27.472，
P<0.05）。
结论:PAK4高表达损伤线粒体功能并显著促进白细胞粘附和内皮细胞迁移。

关键词：糖尿病视网膜病变、p21活化激酶4、视网膜血管内皮细胞、线粒体功能稳态、细胞迁移、白细胞粘附、动物实验、细胞实验

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在线出版日期：2024-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：401-407