前列腺素E2受体对高糖环境中人视网膜微血管内皮细胞炎症小体活化和细胞损伤作用

摘要：

目的:观察前列腺素E2 （PGE2）4种受体（EP
1-4R）对高糖环境中人视网膜微血管内皮细胞（hRMEC）中炎症小体活化和细胞损伤作用。
方法:将hRMEC分为正常组、高糖组，分别置于含5.5、30.0 mmol/L葡萄糖的Dulbecco改良Eagle培养基中培养。采用流式细胞仪观察高糖组、正常组的细胞凋亡率；酶链免疫吸附试验（ELISA）检测hRMEC细胞培养上清液中PGE2水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞环氧化酶2 （COX2）、EP
1-4R的蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测hRMEC中EP
1-4R mRNA的表达。高糖组细胞培养后72 h后，将其再分为对照组、PGE2组、EP
1-4R激动剂组、PGE2+EP
1-4R抑制剂组、二甲基亚砜组。根据组别，各组给予相应的激动剂或抑制剂继续培养24 h。采用qRT-PCR检测各组细胞核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白（NLRP3 ）、白细胞介素（IL）-1β前体（pro-IL-1β）mRNA的表达；ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β、乳酸脱氢酶（LDH）的含量；Western blot检测各组细胞活化的半胱氨酸天冬氨酸酶（Caspase）-1蛋白表达。同时对高糖环境的hRMEC给予IL-1β刺激24 h，检测其细胞培养上清液中LDH的活性。
结果:高糖组hRMEC细胞凋亡率、COX2蛋白表达、PGE2蛋白含量较正常组明显升高，并呈时间依赖性。与正常组比较，高糖组hRMEC中EP
1R、EP
2R、EP
4R蛋白及mRNA表达水平较正常组升高（
P<0.05 ）。与对照组比较，PGE2组（
t=4.627，
P<0.01）、EP
1-4R激动剂组（
t=3.889、3.583、2.445、3.216，
P<0.05 ）hRMEC中NLRP3 mRNA表达水平明显升高，差异有统计学意义；pro-IL-1β mRNA表达水平有所升高，但差异无统计学意义（PGE2组：
t=1.807，
P>0.05；EP
1-4R激动剂组：
t=1.807、1.477、0.302、1.926，
P>0.05）。与PGE2组比较，PGE2+EP
2R抑制剂组hRMEC中NLRP3 mRNA表达水平明显降低，差异有统计学意义（
t=2.812，
P<0.05）；PGE2+EP
3R抑制剂组hRMEC中pro-IL-1β mRNA表达水平明显升高，差异有统计学意义（
t=4.113，
P<0.01）。PGE2组、EP
1R激动剂组、EP
2R激动剂组细胞培养上清液中IL-1β的蛋白含量较对照组明显升高，差异有统计学意义（
t=5.155、4.136、4.817，
P<0.01）；PGE2+EP
2R抑制剂组和PGE2+EP
4R抑制剂组细胞培养上清液中IL-1β的蛋白含量较PGE2组明显降低，差异有统计学意义（
t=1.964、4.765，
P<0.05）。PGE2组和EP
2R激动剂组hRMEC中活化的Caspase-1蛋白表达较对照组明显增多，差异有统计学意义（
t=5.332、4.889，
P<0.05）；PGE2+EP
2R抑制剂组hRMEC中活化的Caspase-1蛋白表达较PGE2组明显降低，差异有统计学意义（
t=6.699，
P<0.01 ）。PGE2组和EP
2R激动剂组细胞培养上清液中LDH活性较对照组明显升高，差异有统计学意义（
t=4.908、4.225，
P<0.05）；PGE2+EP
2R抑制剂组细胞培养上清液中LDH活性较PGE2组明显降低，差异有统计学意义（
t=5.301，
P<0.01 ）。与对照组比较，高糖环境hRMEC细胞培养上清液中LDH活性明显升高，差异有统计学意义（
t=3.499，
P<0.05 ）。
结论:PGE2的4种受体对NLRP3及其效应分子均有不同程度活化作用，其中EP
2R主要介导了高糖环境下hRMEC的损伤。

关键词：受体，前列腺素E、视网膜微血管内皮细胞、NLRP3炎症小体

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资助基金：国家自然科学基金（面上项目）81770941;国家自然科学基金（青年项目）81800845;General Project of National Natural Science Fundation of China81770941;Youth Project of National Natural Science Fundation of China81800845

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：623-631