基质金属蛋白-9抑制剂阻断视网膜色素上皮细胞表面CD73脱落防治实验性自身免疫性葡萄膜炎的初步研究

摘要：

目的:初步探讨MMP-9抑制剂阻断RPE细胞表面CD73脱落，防治实验性自身免疫葡萄膜炎（EAU）的机制。方法:体外培养分离自野生型C57BL/6小鼠及CD73基因敲除（CD73
-/-）小鼠的RPE细胞，以脂多糖及TNF-α共同干预，诱导RPE表面CD73脱落。依据是否同时加入MMP-9抑制剂CTK8G1150（终浓度5.0 μmol/L ），将两种小鼠培养的RPE细胞分别设为MMP-9抑制剂干预组及无干预对照组。每组细胞给予溶媒、1 μmol/L单磷酸腺苷（AMP）、1 μmol/L AMP及3 μmol/L 5'-α,β-亚甲基-二磷酸腺苷（APCP）（AMP+ APCP）进行干预。氚化胸苷掺入法检测不同组别RPE细胞对CD4
+ T细胞增生的刺激作用。分别以野生型B6小鼠及CD73
-/-小鼠为受体，过继免疫诱发EAU。受体小鼠分别随机分为MMP-9抑制剂干预组及未干预对照组，于过继免疫后4、7、10 d视网膜下腔分别注射CTK8G1150或溶媒。实时定量PCR （RT-PCR）、Western blot法检测受体小鼠RPE细胞中CD73 mRNA及蛋白表达。组间比较采用单因素方差分析。
结果:刺激方式为AMP时，C57BL/6 MMP-9抑制剂干预组CD4
+ T细胞的增生能力较无干预组显著下降，差异有统计学意义（
F=13.28，
P<0.01）；溶媒、AMP + APCP时，两组CD4
+ T细胞增生能力比较，差异无统计学意义（
F=7.78、6.58，
P>0.05）。CD73
-/-MMP-9抑制剂干预组、无干预组不同刺激方式CD4
+ T细胞增生能力比较，差异均无统计学意义（
F=5.24、6.12、7.04，
P>0.05）。RT-PCR检测结果显示，B6受体小鼠MMP-9抑制剂组、无干预对照组RPE细胞中CD73 mRNA相对表达量比较，差异无统计学意义（
F=6.54，
P>0.05）。Western blot检测结果显示，B6受体小鼠MMP-9抑制剂组RPE细胞中CD73蛋白表达较未干预对照组显著增加，差异有统计学意义（
F=15.24，
P<0.01 ）。
结论:MMP-9抑制剂阻断RPE细胞表面CD73的脱落对EAU具有保护作用。

关键词：基质金属蛋白酶9/拮抗剂和抑制剂、5'-核苷酸酶、视网膜色素上皮、细胞，培养的、葡萄膜炎/病理生理学、动物实验

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资助基金：国家自然科学基金81570833;National Natural Science Foundation of China81570833

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：289-294