丁基苯酞对过氧化氢诱导下视网膜Müller细胞凋亡的影响

摘要：

目的 观察丁基苯酞(NBP)对过氧化氢(H2O2)诱导下视网膜Müller细胞凋亡的保护作用.方法 体外培养的人视网膜Müller细胞分为正常对照组、模型组(H2O2组)、实验组(H2O2+NBP组).H2O2组、H2O2+NBP组细胞培养液中加入200 μmol/LH2O2刺激2h后,H2O2组更换为完全培养基,H2O2+NBP组更换为含l μmol/L NBP的完全培养基.正常对照组为常规培养细胞.苏木精-伊红(HE)染色观察各组细胞形态改变;噻唑蓝(MTT)比色法检测NBP作用24、48 h后各组细胞活性;Hoechst33258染色观察各组细胞凋亡情况;LIVE/DEAD(R)细胞活性/细胞毒性试剂盒检测各组细胞生存力;二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)+内质网(ER)红色荧光探针(ER-Tracker Red)双染色观察各组细胞ER中活性氧(ROS)的表达水平.单因素方差分析联合Dunnett统计学方法进行数据分析.结果 HE染色结果显示,H2O2+NBP组细胞数量较H2O2组增加.MTT比色法检测结果发现,NBP作用24、48 h后,正常对照组与H2O2组、H2O2组与H2O2+NBP组细胞生存力比较,差异均有统计学意义(t=28.96、3.658、47.58、20.33,P＜0.001、0.022).Hoechst33258结果显示,H2O2+NBP组细胞少数细胞核边集呈新月状且细胞核碎裂减少,其余细胞蓝色荧光均匀.LIVE/DEAD@细胞活性/细胞毒性试剂盒检测结果显示,H2O2组中呈红色荧光的死亡细胞明显增多,呈绿色荧光的活细胞数量显著减少;H2O2+NBP组呈绿色荧光的活细胞数量增多,呈红色荧光的死亡细胞减少.DCFH-DA+ER-TrackerRed双染色结果显示,H2O2组细胞中绿色荧光强度明显增强;H2O2+NBP组细胞中绿色荧光强度较H2O2组明显降低.结论 NBP通过抑制ROS的产生缓解H2O2诱导的人视网膜Müller细胞凋亡.

关键词：丁基苯酞、氧化应激、细胞凋亡、过氧化氢、Müller细胞

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分类号：R774(眼科学)

资助基金：国家自然科学基金81570872;天津市卫计委青年医学新锐人才项目;天津市应用基础与前沿技术研究计划15JCYBJC24900;天津医科大学自然科学基金2016KYZM16;天津医科大学眼科研究所科研临床基金15YKYJS001;天津医科大学校级基金2006KY27National Natural Science Foundation of China81570872;Tianjin Municipal Health Planning Commission for Young Talents;Tianjin Applied Basic and Frontier Technology Research Program15JCYBJC24900;Natural Science Foundation of Tianjin Medical University2016KYZM16;Research Clinical Fund of Tianjin Medical University Eye Institute15YKYJS001;Tianjin Medical University School Fund2006KY27

在线出版日期：2018-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：481-486