小干扰RNA介导丝氨酸蛋白酶HtrA1沉默对光损伤人视网膜色素上皮细胞的影响

摘要：

目的 观察丝氨酸蛋白酶HtrA1沉默对光损伤人视网膜色素上皮(RPE)细胞的影响.方法 体外培养人RPE细胞,取第8～12代生长良好的传代细胞用于实验.将细胞分为正常对照组、光损伤模型组.采用波长400 nm的蓝色节能灯以(2000±500) Lux持续光照RPE细胞6h建立光损伤模型.建模后光损伤模型组再分为针对HtrA1的小干扰RNA(HtrA1 siRNA)组、阴性对照组、空白对照组.应用脂质体RNAimax将HtrA1 siRNA转染至HtrA1 siRNA组细胞;阴性对照组细胞转染非特异的阴性siRNA;空白对照组为单纯光损伤细胞.采用细胞计数试剂盒、transwell小室法及流式细胞仪检测各组细胞增生、迁徙、凋亡以及细胞周期情况;实时聚合酶链反应和蛋白免疫印迹法检测细胞中HtrA1和血管内皮生长因子A(VEGF-A) mRNA、蛋白质表达.结果 光损伤模型组细胞中HtrA1 mRNA、蛋白表达均较正常对照组细胞明显升高,差异有统计学意义(t=17.62、15.09,P＜0.05).与阴性对照组、空白对照组比较,HtrA1 siRNA组细胞增生(t=6.37、4.52)、迁徙能力(t=9.56、12.13)、凋亡率(t=23.37、29.08)明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞停留在G0/G1期数目增多(t=6.24、4.93),差异有统计学意义(P＜0.05);HtrA1、VEGF-A mRNA(t=17.36、11.32、7.29、4.05)和蛋白(t=12.02、15.28、4.98、6.24)表达均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 特异性沉默HtrA1基因表达可降低蓝光对人RPE细胞增生、迁徙能力的损伤和细胞凋亡率;下调VEGF-A的表达.

关键词：视网膜色素上皮/病理生理学、血管内皮生长因子A、RNA干扰、丝氨酸蛋白酶类、光刺激/副作用、动物实验

所属期刊栏目：32

分类号：R774(眼科学)

资助基金：National Natural Science Foundation of China81271025,81271023国家自然科学基金81271025、81271023

在线出版日期：2016-08-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：413-417