双孔钾离子通道激动剂利鲁唑对叔丁基过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的作用

摘要：

目的 观察双孔钾离子通道蛋白(TRAAK K2P)持续性激动剂利鲁唑对叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导体外培养的人视网膜色素上皮(hRPE)细胞氧化损伤的作用,探讨其作用机制.方法 原代培养hRPE细胞,取第3～5代细胞进行实验.将hRPE细胞分为正常对照组、模型组和2、5、10、20 μmol/L加药组及利鲁唑单药组.采用噻唑蓝比色法检测各组细胞存活率,以此确定利鲁唑最佳干预浓度进行后续实验.将hRPE细胞分为正常对照组、模型组、模型加药组及利鲁唑单药组,采用流式细胞仪检测各组细胞的正常细胞率和早期凋亡率；倒置显微镜观察各组细胞的形态变化；激光共聚焦显微镜观察各组细胞核的形态变化和TRAAK K2P表达.结果 与模型组比较,仅有10 μmol/L模型加药组细胞存活率明显升高,差异有统计学意义(t=4.84,P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,正常对照组、模型组、模型加药组及利鲁唑单药组正常细胞率分别为(97.6±1.3)％、(70.3±7.0)％、(86.9±5.2)％、(93.9±1.5)％；正常对照组、模型加药组及利鲁唑单药组分别与模型组比较,差异均有统计学意义(t=7.53、4.59、6.49,P＜0.05)；模型加药组与正常对照组、利鲁唑单药组比较,差异均无统计学意义(t=2.94、1.91,P＞0.05).细胞早期凋亡率分别为(1.37±0.98)％、(25.50±8.02)％、(1.20±0.72)％、(5.20±2.00)％,正常对照组、模型加药组及利鲁唑单药组分别与模型组比较,差异均有统计学意义(t=7.07、7.13、5.94,P＜0.05)；模型加药组与正常对照组、利鲁唑单药组比较,差异均无统计学意义(t=0.06、1.18,P＞0.05).正常对照组及利鲁唑单药组细胞呈梭形或多角形,细胞核呈均匀规则的椭圆形；模型组部分细胞肿胀、变圆、漂浮及细胞核固缩；模型加药组个别细胞肿胀、变圆和细胞核固缩.正常对照组、模型组、模型加药组及利鲁唑单药组TRAAKK2P表达分别为0.040±0.003、0.041±0.001、0.049±0.001、0.055±0.001.4组间TRAAK K2P表达比较,模型组与正常对照组间差异无统计学意义(t=0.80,P＞0.05)；模型加药组、利鲁唑单药组与正常对照组间差异均有统计学意义(t=7.40、12.70,P＜0.05).结论 利鲁唑能在早期凋亡阶段保护hRPE细胞免受t-BHP诱导的氧化损伤.利鲁唑上调TRAAK K2P蛋白在细胞中的表达可能是其机制之一.

关键词：视网膜色素上皮、叔丁基氢过氧化物

所属期刊栏目：29

分类号：R774(眼科学)

资助基金：国家自然科学基金;高等学校博士学科点专项科研基金

在线出版日期：2013-09-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：400-405