两种fms-样络氨酸激酶受体-1基因片段对磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白酶B之间信号通路的影响
目的 观察可溶性fms-样络氨酸激酶受体-1(sFlt-1)基因胞外第2～3区和2～4区对缺氧、高糖环境下视网膜血管通透性及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白酶B(PI3K/Akt)之间信号通路的影响.方法 构建真核表达质粒编码增强型绿色荧光蛋白质粒(pcDNA3.1-EGFP)/s Flt-1(2～3)和pcDNA3.1-EGFP/s Flt-1(2～4),采用酶切、电泳及基因测序鉴定.将实验分为正常对照组、缺氧组和高糖组进行.以羧甲基化匍聚糖(CMD)纳米磁颗粒为基因载体,分别携带两种重组质粒转染缺氧、高糖条件下培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC).采用分光光度计检测各组兔视网膜血管对伊凡思蓝(EB)染料的渗漏量.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫蛋白印迹(Western blot)法分别检测各组细胞PI3K/Akt信号通路下游特异性磷酸化激酶Akt(p-Akt)mRNA和蛋白的表达.结果 缺氧组和高糖组注射转染细胞上清液后,视网膜血管EB渗漏量较正常对照组明显增加(t=2.476,2.515;P值均＜0.01).缺氧组和高糖组转染了pcDNA3.1-EGFP/sFlt-1(2～3)和pcDNA3.1-EGFP/sFlt-1(2～4)后,视网膜血管EB渗漏量较未转染明显降低(t=2.598,2.679,2.386,2.732;P值均＜＜0.01).缺氧组、高糖组HUVEC p-Akt mRNA表达较正常对照组明显上调(t=2.612,2.545;P值均＜0.01),转染pcDNA3.1-EGFP/sFlt-1(2～3)和pcDNA3.1-EGFP/sFlt-1(2～4)后明显下调(t=2.512,2.189,2.372,2.687;P值均＜0.01).缺氧组和高糖组HUVEC p-Akt蛋白表达较正常对照组明显上调(t=2.376,2.712;P值均＜0.01),转染pcDNA3.1-EGFP/sFlt-1(2～3)和pcDNA3.1-EGFP/sFlt-1(2～4)后明显下调(t=2.259,2.391,2.399,2.413;P值均＜0.01).结论 sFlt-1受体胞外第2～3区和2～4区均可抑制缺氧、高糖环境下的视网膜血管通透性增高和PI3K/Akt通路的信号传导.
血管内皮生长因子受体1、1-磷脂酰肌醇3-激酶、组织蛋白酶B、糖尿病视网膜病/病理生理学、基因转移技术
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R774.1(眼科学)
上海市科委登山计划资助项目064119543
2010-10-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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