脑源性神经营养因子-绿色荧光蛋白融合基因载体的构建、鉴定及初步应用研究

摘要：

目的 构建脑源性神经营养因子(BDNF)绿色荧光蛋白(GFP)融合表达质粒,观察其融合蛋白的特性.方法 将BDNF cDNA片段插入pcDNA3.1/NT-GFP-TOPO真核表达质粒,使其与GFP同处一个阅读框架中,测序鉴定后,转染培养的雪旺细胞,用免疫组织化学和蛋白质印迹(Western botting)观察外源性目的 蛋白的表达情况,并用该质粒活体转染视神经切断的大鼠模型,观察所表达外源性蛋白的神经保护作用.结果 测序证实质粒构建成功.Western botting结果 显示.BDNF-GFP融合蛋白表达一相对分子质量为41×103大小条带.荧光显微镜下可见BDNF-GFP转染的细胞发出绿色荧光,免疫组织化学染色后,可见绿色荧光与红色荧光完全重合.转染BDNF-GFP质粒和GFP质粒的大鼠视神经切断术后7d存活视网膜神经节细胞(RGC)分别为(1201±286)、(482±151)个/mm2,存活百分比分别为(51.39±12.24)%和(20.62±6.46)%;28 d时存活的RGC分别为(715±71)、(112±24)个/mm2,存活百分比分别为(30.59±3.04)%和(4.79±1.03)%.两组存活百分比比较,差异有统计学意义(t=3.144,11.378;P<0.01).结论 BDNF-GFP融合表达载体可以转录翻译为一融合蛋白,该蛋白可自发绿色荧光,并具有BDNF的生物学活性.

关键词：脑源性神经营养因子/治疗应用、视网膜神经节细胞/病理生理学、基因疗法、动物实验

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分类号：R774(眼科学)

资助基金：国家自然科学基金30300379,30672281;上海市自然科学基金034119807;国家重点基础研究发展计划2007CB512204;教育部新世纪优秀人才计划NCET-05-0370;复旦大学脑科学开放基金;上海医学院交叉基金;医学神经生物学重点实验室开放课题09-07

在线出版日期：2009-11-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：372-375