密度梯度离心法分离和纯化视网膜色素上皮细胞

摘要：

目的观察密度梯度离心法分离、纯化原代及传代视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的效果. 方法将原代及传代后仍有成纤维细胞污染的人RPE细胞分别各分为实验组和对照组,实验组用聚蔗糖(ficoll)-泛影葡胺(ficoll hypaque, F/H )(d=1.077 g/ml)进行等密度梯度离心分离,对照组用常规离心分离纯化,0.4%台盼蓝拒染活细胞计数;抗人细胞角蛋白(cytokeratin,CK)间接免疫荧光染色,流式细胞术分析;荧光显微镜观察细胞形态;观察细胞的生长状态和初步克隆形成率;共聚焦显微镜观察细胞纯化结果及其生长状态. 结果实验组细胞存活率均高于对照组(P＜0.001),但是细胞数量减少;流式细胞术分析结果显示实验组CK阳性细胞率高于对照组(P＜0.001); ficoll 离心组涂片细胞呈圆形,边界清晰,荧光染色均匀,活力好;实验组RPE细胞形态较均一,贴壁时间短,进入分裂期快,初步细胞克隆形成率高于对照组(P＜0.001);爬片生长的RPE细胞CK阳性细胞率两组组间比较差异有显著性的意义(P均<0.001). 结论 ficoll密度梯度离心法分离的RPE细胞形态均一,生长一致性好,进入细胞倍增期时间短,细胞活力保持好;细胞纯化效果较好.

关键词：色素上皮、眼、细胞培养、离心法、梯密度

所属期刊栏目：19

分类号：R33-33;R446(人体生理学)

资助基金：国家自然科学基金399070780

在线出版日期：2004-01-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：372-376