NLRP3介导的细胞焦亡在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

摘要：

目的 探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)介导的细胞焦亡在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用.方法 为明确缺氧/复氧是否会引起细胞焦亡,采用抓阄法将H9c2心肌细胞随机分为2组:对照组(细胞不予缺氧/复氧处理)和缺氧/复氧组(细胞进行缺氧/复氧处理);为了明确焦亡在缺氧/复氧损伤中的作用,采用抓阄法将细胞随机分为4组:对照组(细胞正常培养)、YVAD组[用含有20 μm Z-缬氨酸-丙氨酸-消旋天冬氨酸(甲酯)-氟甲基酮(Z-YVAD-FMK)的培养基预处理4h后,换普通培养基正常培养]、缺氧/复氧组(细胞进行缺氧/复氧处理)和YVAD+缺氧/复氧组(用含有20 μm Z-YVAD-FMK的培养基处理4h后,再进行缺氧/复氧处理);为明确缺氧/复氧诱导的细胞焦亡是否与NLRP3有关,采用抓阄法将细胞随机分为4组:对照组[培养基中加入非特异性小干扰RNA(si-RNA)]、si-NLRP3组(培养基中加入NLRP3的si-RNA)、缺氧/复氧组(对培养基中加入非特异性si-RNA的细胞进行缺氧/复氧处理)和si-NLRP3+缺氧/复氧组(对培养基中加入NLRP3 si-RNA的细胞进行缺氧/复氧处理).采用碘化丙啶(PI)染色检测细胞膜上的孔隙形成,采用CCK8法检测细胞活力,采用Western blot检测NLRP3、焦亡相关蛋白Caspase-1和白细胞介素1β(IL-1[β)的蛋白表达水平.结果 (1)缺氧/复氧组PI染色阳性率[(26.46±5.15)％比(1.69±0.73)％]、NLRP3(0.57±0.16比0.23±0.06)、Caspase-1(1.07±0.13比0.37±0.08)和IL-1β(0.38±0.08比0.16±0.05)蛋白表达水平均高于对照组(P均＜0.01).(2)YVAD+缺氧/复氧组细胞活力高于缺氧/复氧组[(87.31±9.05)％比(73.30±7.19)％,P＜0.05],PI染色阳性细胞率低于缺氧/复氧组[(18.12±4.36)％比(26.45±4.60)％,P＜0.05],Caspase-1(0.72±0.12比1.07±0.15,P＜0.05)和IL-1β(0.29±0.07比0.39±0.06,P＜0.05)蛋白表达水平均低于缺氧/复氧组.(3) si-NLRP3+缺氧/复氧组细胞活力高于缺氧/复氧组[(85.46±7.71)％比(72.41±5.53)％,P＜0.05],PI染色阳性率低于缺氧/复氧组[(18.22±4.20)％比(26.73±3.26)％,P＜0.05],Caspase-1(0.87±0.07比1.15±0.15,P＜0.05)和IL-1β(0.41±0.07比0.58±0.10,P＜0.05)蛋白表达水平均低于缺氧/复氧组.结论 NLRP3介导的细胞焦亡与心肌细胞缺氧/复氧损伤有关.

关键词：肌细胞、心脏、缺氧/复氧、焦亡

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资助基金：国家自然科学基金项目81600232;四川省教育厅重点项目17ZA0183;南充市市校合作科研专项18SXHZ0458,NSMC20170210;川北医学院博士科研启动基金CBY15-QD12National Natural Science Foundation of China81600232;Key Projects of Sichuan Provincial Education Department17ZA0183;Science and Technology Strategic Special Cooperation between City and University in Nanchong18SXHZ0458,NSMC20170210;North Sichuan Medical College Doctoral Research Initial FundCBY15-QD12

在线出版日期：2019-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：471-478