PEP-1-CAT融合蛋白预处理对过氧化氢诱导的内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

摘要：

目的 采用体外培养的人脐静脉内皮细胞株(CRL-1730),研究PEP-1肽介导人过氧化氢酶(CAT)穿透细胞的能力,并探讨PEP-1-CAT对过氧化氢(H2O2)诱导的内皮细胞氧化应激损伤是否有保护作用.方法 构建原核表达质粒pET15b-PEP-1-CAT,将其在基因工程菌中表达出N端带有6个组氨酸"标签"(His-tag)的重组蛋白,并通过金属镍螯合亲和层析对其进行纯化,将纯化得到的PEP-1-CAT融合蛋白加入体外培养的人脐静脉内皮细胞,通过Western blot来分析其转导能力,同时对转导入细胞内的蛋白进行酶活性检测.然后以0.5 mmol/L H2O2处理细胞建立内皮细胞氧化应激损伤的模型,检测不同浓度的PEP-1-CAT蛋白对氧化应激下细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)含量的影响.结果 PEP-1-CAT融合蛋白能以时间、剂量依赖的方式高效转导进入细胞内.正常内皮细胞LDH活性和细胞存活率分别为(540.6±65.7)U/L和100%;H2O2处理组LDH活性显著高[(849.3±95.1)U/L,P＜0.01],细胞存活率明显低[(37.23±5.68)%,P＜0.01],MDA含量亦较正常组显著高[(8.23±1.58)nmol/L比(2.46±1.42)nmol/L,P＜0.01].用不同浓度的PEP-1-CAT对细胞进行预保护,均可显著提高细胞存活率、降低LDH释放量,并提高细胞的抗氧化能力,表现为MDA含量较H2O2处理组低(P＜0.05或＜0.01).结论 PEP-1-CAT融合蛋白能以天然活性形式高效转导入人脐静脉内皮细胞,且转导的蛋白能有效对抗氧化应激损伤.这种蛋白转导方式,为用CAT防治各种与氧化应激损伤有关的疾病提供了一个新的治疗途径.

关键词：过氧化氢酶、内皮、血管、PEP-1肽、氧化应激

所属期刊栏目：34

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2006-11-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：932-938