芒柄花黄素通过调控miR-140-5p/TIGIT轴影响喉鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡

摘要：

目的:探讨芒柄花黄素对喉鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能的机制。方法:体外培养人喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2，以MTT法检测0、5、10、20、40、60 μmol/L芒柄花黄素处理24 h后Hep-2细胞活力，根据IC50值筛选出芒柄花黄素合适作用浓度。Hep-2细胞分别采用20、40 μmol/L芒柄花黄素，40 μmol/L芒柄花黄素+阴性对照（转染mirRNA-140-5p抑制剂阴性对照），40 μmol/L芒柄花黄素+miR-140-5p inhibitor干预细胞敲减干预Hep-2细胞。分组转染及药物处理后，采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）实验和免疫印迹检测Hep-2细胞miR-140-5p与T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域蛋白（TIGIT）表达；采用MTT法和平板集落形成实验检测Hep-2细胞增殖；采用流式细胞实验检测Hep-2细胞凋亡；采用免疫印迹检测Hep-2细胞增殖（PCNA、Cyclin D1）与凋亡相关蛋白（Bax、cleaved caspase-3）表达。于裸鼠背部皮下注射Hep-2细胞构建裸鼠移植瘤模型，随机分为对照组，25、50 mg/kg芒柄花黄素组，50 mg/kg芒柄花黄素+阴性对照组，50 mg/kg芒柄花黄素+ miR-140-5p敲减组，分组处理后，检测各组裸鼠移植瘤质量与体积；采用双荧光素酶报告实验分析Hep-2细胞miR-140-5p对TIGIT的靶向调控。两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用SNK-q检验。结果:与对照比较，20、40 μmol/L芒柄花黄素干预细胞miR-140-5p表达（1.79±0.16、2.58±0.22比1.04±0.11）、凋亡率[（36.17±8.14）%、（68.65±14.20）%比（2.10±0.65）%]、Bax与cleaved caspase-3蛋白表达升高（P < 0.05），TIGIT蛋白（0.56±0.12、0.17±0.01比0.98±0.10）与mRNA表达（0.68±0.10、0.34±0.03比1.05±0.13）、集落生成率[（60.82±12.24）%、（35.36±8.20）%比（100.0±0.00）%]、细胞活力（63.12±11.03、39.75±7.14比100.0±0.00）、PCNA与Cyclin D1蛋白表达降低（P < 0.05）；与40 μmol/L芒柄花黄素比较，芒柄花黄素+miR-140-5p敲减细胞miR-140-5p表达（1.11±0.13比2.58±0.22）、凋亡率[（5.04±1.51）%比（68.65±14.20）%]、Bax与cleaved caspase-3蛋白表达降低（P < 0.05），TIGIT蛋白（0.92±0.18比0.17±0.01）与mRNA表达（0.97±0.14比0.34±0.03）、集落生成率[（90.76±15.02）%比（35.36±8.20）%]、细胞活力（92.01±17.13比39.75±7.14）、PCNA与Cyclin D1蛋白表达升高（P < 0.05）；动物实验中，与对照组比较，25、50 mg/kg芒柄花黄素组裸鼠移植瘤质量[（609.23±58.14）、（465.87±41.26）比（762.14±76.51） mg]降低，体积[（532.82±60.28）、（396.34±48.10）比（681.70±72.44）mm3]减小（P < 0.05）；与50 mg/kg芒柄花黄素组比较，芒柄花黄素+miR-140-5p敲减组裸鼠移植瘤质量[（735.48±80.12）比（465.87±41.26）mg]升高，体积[（654.79±75.85）比（396.34±48.10） mm3]增加（P < 0.05）；Hep-2细胞miR-140-5p可靶向下调TIGIT表达。结论:芒柄花黄素通过调控miR-140-5p/TIGIT轴表达抑制喉鳞状细胞癌细胞增殖活性，并促进其凋亡。

关键词：芒柄花黄素、miR-140-5p/TIGIT、喉鳞状细胞癌细胞、增殖、凋亡

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在线出版日期：2023-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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