无异源培养条件下人多能干细胞系H1非病毒转染方法的比较和优化

摘要：

目的 将人类多能干细胞(hPSCs)进行基因编辑和分化是干细胞治疗的发展趋势.所以在无异源(Xeno-free)的培养条件下,系统地比较研究非病毒的干细胞转染方法有助于临床科研的发展.方法 采用E8和Vitronectin人类干细胞Xeno-free培养系统培养人类H1干细胞系,从细胞活力、干细胞分化标记和转染效率三个方面比较并优化了3种主流的非病毒转染方法,分为空白对照组(正常培养的H1,未做任何处理)、转染GFP荧光质粒的电转组、脂质体组和磷酸钙组.多组间比较采用单因素方差分析和Tukey多重比较.结果 3种转染方法对H1细胞的分化都没有显著的影响,转染后各组99.4﹪以上的细胞分型为SSEA1-TRA-1-60+.从形态上观察,磷酸钙转染对干细胞损伤严重;电转和脂质体转染对细胞的损伤较小,且可以在Xeno-free培养系统下对干细胞形成有效转染.转染效率方面:优化前,与对照组、电转组、磷酸钙组的GFP阳性细胞率[(0.46±0.10)﹪、(0.06±0.10)﹪、(0.14±0.24)﹪]相比,脂质体组的转染效率(7.99±0.47)﹪最高(P均<0.01).优化试剂浓度和程序后,电转组的转染效率升高到(65.47±3.07)﹪,比优化后的脂质体组和磷酸钙组的效率都要高[(14.7±0.26)﹪和(4.84±0.25)﹪],差异有统计学意义(P?<0.01).结论 电转和脂质体转染适用于Xeno-free培养系统下人类多能干细胞系H1的转染,优化后利用电转程序A13转染H1细胞可以获得本实验中最高的转染效率.

关键词：无异源;人多能干细胞;非病毒转染

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资助基金：北京市自然科学基金;北京市李桓英医学基金会人才培养基金

在线出版日期：2021-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：305-310