circSERPINE2靶向miR-106b-5p对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

摘要：

目的 探讨circSERPINE2对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及机制.方法 体外培养大鼠心肌细胞H9c2,分为对照组(用常规培养基置于常规培养箱中培养7 h)、H/R组[无血清低糖DMEM培养基缺氧(不含氧)培养3 h后,10﹪FBS的DMEM培养基复氧(19.95﹪氧)培养4 h]、H/R+pcDNA组(转染pcDNA至H9c2细胞后进行H/R处理)、H/R+pcDNA-circSERPINE2组(转染pcDNA-circSERPINE2至H9c2细胞后进行H/R处理)、H/?R+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC至H9c2细胞后进行H/R处理)、H/R+anti-miR-106b-5p组(转染anti-miR-106b-5p至H9c2细胞后进行H/R处理)、H/R+pcDNA-?circSERPINE2+?miR-NC组(共转染pcDNA-circSERPINE2和miR-NC至H9c2细胞后进行H/R处理)和H/?R+pcDNA-circSERPINE2+miR-106b-5p组(共转染pcDNA-?circSERPINE2和miR-106b-5p mimics至H9c2细胞后进行H/R处理).用RT-qPCR法检测细胞中circSERPINE2和miR-106b-5p表达,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹法检测细胞中cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达,试剂盒检测细胞中MDA含量、SOD和GSH-Px活性.双荧光素酶报告基因实验检测circSERPINE2和miR-106b-5p调控关系.方差齐性,两组间比较用t检验;方差不齐,两组间比较用t'检验.结果 与对照组比较,H/R组H9c2细胞中circSERPINE2表达(1.00±0.06比0.43±0.04)、SOD[(77.84±6.49)U/mL比(23.19±2.21)U/mL]和GSH-Px活性[(59.21±5.31)U/mL比(17.62±1.53)U/mL]均降低,而miR-106b-5p表达(1.00±0.07比2.66±0.23)、细胞凋亡率[(6.53±0.52)﹪比(24.21±2.18)﹪]、cleaved caspase-3(0.24±0.02比0.72±0.05)、cleaved caspase-9蛋白表达(0.13±0.02比0.65±0.04)和MDA含量[(5.23±0.47)nmol/L比(45.56±4.33)nmol/L]均升高,差异有统计学意义(P均<0.05).与H/R+pcDNA组比较,H/R+pcDNA-circSERPINE2组H9c2细胞凋亡率[(26.34±2.23)﹪比(10.08±0.81)﹪]、cleaved caspase-3(0.75±0.05比0.32±0.04)和cleaved caspase-9蛋白表达(0.67±0.05比0.25±0.03)及MDA含量[(49.18±4.89)nmol/L比(6.79±0.59)nmol/L]均降低,而SOD[(21.42±2.03)U/mL比(63.57±6.44)U/mL]和GSH-Px活性[(16.06±1.42)U/mL比(47.94±5.52)U/mL]均升高,差异有统计学意义(P均?<0.05).与H/R+anti-miR-NC组比较,H/R+anti-miR-106b-5p组H9c2细胞凋亡率[(26.23±2.15)﹪比(13.87±1.26)﹪]、cleaved caspase-3(0.78±0.06比0.38±0.03)和cleaved caspase-9蛋白表达(0.68±0.05比0.31±0.03)及MDA含量[(48.38±4.21)nmol/L比(11.39±1.42)nmol/L]均降低,而SOD[(22.19±2.21)U/mL比(54.33±5.25)U/mL]和GSH-Px活性[(15.84±1.68)U/mL比(40.42±3.51)U/mL]均升高,差异有统计学意义(P均<0.05).circSERPINE2靶向结合并负调控miR-106b-5p表达.与H/R+pcDNA-circSERPINE2+miR-NC组比较,H/R+pcDNA-?circSERPINE2+miR-106b-5p组H9c2细胞细胞凋亡率[(9.86±1.04)﹪比(18.47±1.24)﹪]、cleaved caspase-3(0.31±0.03比0.66±0.04)、cleaved caspase-9蛋白表达(0.23±0.02比0.56±0.06)及MDA含量[(6.56±0.61)nmol/L比(36.97±3.14)nmol/L,P?<0.05]均升高,而SOD[(64.14±6.32)U/mL比(32.26±3.58)U/mL]和GSH-Px活性[(48.40±5.06)U/mL比(25.58±3.11)U/mL]均降低,差异有统计学意义(P均?<0.05).结论 上调circSERPINE2可抑制H/R诱导的大鼠心肌细胞凋亡及氧化应激反应,其作用机制可能通过靶向下调miR-106b-5p表达有关.

关键词：心肌细胞;circRNA;miR-106b-5p;细胞凋亡;氧化应激

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资助基金：首都卫生发展科研项目2020-3-7122

在线出版日期：2021-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：284-291