甘草提取物通过调控miR-212-5p/BCL2L2基因抑制甲状腺肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

摘要：

目的 探讨甘草提取物GL-1对甲状腺肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制.方法 以10、20、30μg/mL GL-1处理甲状腺肿瘤细胞CAL-62,或在CAL-62细胞中转染miR-212-5p mimics、anti-miR-212-5p、si-BCL2L2、pcDNA-BCL2L2.其中转染pcDNA-BCL2L2细胞并以30μg/mL GL-1处理.噻唑蓝比色法(MTT)检测CAL-62细胞增殖,Transwell小室法检测CAL-62细胞迁移和侵袭,实时定量PCR(qPCR)检测CAL-62细胞中miR-212-5p表达,Western blot检测相关蛋白Bcl-2样蛋白2(BCL2L2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达.生物学信息预测miR-212-5p的下游靶基因,双荧光素酶基因报告实验进一步验证.数据采用单因素方差分析、Tukey's事后检验和t检验.结果 与对照组相比,10、20、30μg/mL浓度GL-1降低CAL-62细胞24、48、72 h的细胞活性(P<0.05),并呈剂量、时间依赖性.与对照组相比,10、20、30μg/mL浓度GL-1干预后,CAL-62细胞侵袭数[(143.56±14.22)个、(100.32±10.23)个、(68.23±6.49)个比(189.65±15.23)个]、迁移数[(198.56±14.35)个、(141.35±12.58)个、(89.56±8.95)个比(295.36±17.56)个]和BCL2L2蛋白表达量(0.76±0.08、0.51±0.06、0.24±0.02比1.00±0.12)均降低(P均<0.05),而miR-212-5p水平(1.61±0.11、1.99±0.13、2.28±0.15比1.00±0.07)升高(P<0.05),并呈剂量依赖性.过表达miR-212-5p和沉默BCL2L2表达在24、48、72 h时CAL-62细胞活性、细胞迁移数、侵袭数和Cyclin D1、MMP-2蛋白表达量降低(P<0.05).生物学信息预测和双荧光素酶基因报告实验证实BCL2L2是miR-212-5p的靶基因.过表达miR-212-5p抑制BCL2L2蛋白水平,沉默miR-212-5p促进BCL2L2蛋白表达(P<0.05).过表达BCL2L2可逆转GL-1对CAL-62细胞增殖、迁移、侵袭及Cyclin D1、MMP-2蛋白表达的抑制作用.结论 GL-1通过miR-212-5p/BCL2L2抑制甲状腺肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭.

关键词：甘草、miR-212-5p、BCL2L2、甲状腺肿瘤、增殖

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在线出版日期：2021-03-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：25-33