抑制NANOG表达对人食管鳞癌Eca-109干细胞增殖的影响

摘要：

目的 采用NANOG短发夹RNA (shRNA)转染CD133+Eca-109食管鳞癌肿瘤干细胞,观察细胞增殖能力的变化,及NANOG对食管鳞癌干细胞的基因治疗效果.方法 采用无血清培养基悬浮培养法分离食管鳞癌干细胞并通过RT-PCR和Western-Blot法检测分选效果.采用针对NANOG不同mRNA序列的两个shRNA分别转染食管鳞癌干细胞设为sh-N1组和sh-N2组,同时将转染不针对任何mRNA序列的质粒设为对照NC组.采用RT-PCR和Western-Blot法检测细胞NANOG表达水平.采用CCK-8法检测细胞增殖能力.采用活死细胞染色检测细胞存活情况.采用无血清培养基悬浮培养并通过计数检测细胞成球能力.NANOG表达水平、CCK-8实验测得数据的比较采用单因素方差分析.结果 RT-PCR结果显示,正常培养的Eca-109食管鳞癌细胞CD133、CD44的表达水平1.03±0.02,1.02±0.02明显低于悬浮培养分离后肿瘤干细胞球中的表达10.12±0.19,9.21±0.26,(t=-79.952,-57.919;P均＜0.01).Western-Blot方法检测所得CD133、CD44表达结果与RT-PCR一致.shRNA转染食管鳞癌干细胞后,CCK-8实验结果显示,sh-N1组和sh-N2组细胞于24、48、96 h测得的A值分别为(0.33±0.02,0.52±0.04,0.61±0.04,0.81±0.03),(0.33±0.02,0.45±0.04,0.53±0.04,0.72±0.07),较对照NC组(0.9±0.01,1.41±0.01,2.31±0.02,3.12±0.07)下调(F=1121.33,525.73,1022.16,1198.29;P均＜0.01),但并未出现细胞凋亡;在无血清培养条件下,细胞球计数结果显示,sh-N1组和sh-N2组(12±l,16±2)细胞形成肿瘤干细胞球的能力较NC组(80±3)降低(P＜0.01).结论 NANOG敲低对食管鳞癌干细胞的增殖具有明显的抑制效果,有望成为针对食管鳞癌的有效靶向性治疗手段.

关键词：食管癌、肿瘤干细胞、NANOG、CD133

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资助基金：四川省教育厅自然科学重点科研项目16ZA0235;四川省卫生和计划生育委员会普及应用科研项目17PJ503;南充市科技局应用技术研究与开发项目16YFZJ0031;川北医学院校级重点项目CBY15-A-ZD06

在线出版日期：2018-05-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：345-350