miR-30a-5p对人肝癌干细胞增殖和凋亡的影响

摘要：

目的 采用miR-30a-5p模拟物转染CD133+ MHCC97L肝癌干细胞,观察增殖和凋亡能力的变化,明确miR-30a-5p对肝癌干细胞的基因治疗效果.方法 采用免疫磁珠分选法分选CD133+ MHCC97L肝癌干细胞并采用流式细胞术检测分选效果.分别采用miR-30a-5p模拟物或抑制物转染肝癌干细胞设为30 aM组或30 aⅠ组,并设立空白对照NC组.采用RT-PCR法检测细胞miR-30a-5p表达水平.采用CCK-8法检测细胞增殖能力.采用琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成能力.采用流式细胞术检测细胞凋亡率.肝癌干细胞分选效率、miR-30a-5p表达水平、CCK-8实验测得A值、克隆形成数量和细胞凋亡率实验数据的比较采用单因素方差分析和t检验.结果 未进行磁珠分选的MHCC97L肝癌细胞CD133阳性率为(1.42±0.26)％,低于分选后的MHCC97L细胞中CD133的阳性率(94.48±2.32)％,差异具有统计学意义(t=-6.78,P=0.04).RT-PCR实验结果显示,30aM组CD133+MHCC97L肝癌干细胞中miR-30a-5p的相对表达水平(20.21±1.92)较NC组(1.03±0.02)明显上调;30aⅠ组的相对表达水平(0.13±0.01)较NC组明显下调,差异均具有统计学意义(t=20.96,-6.22;P=0.01,0.03).CCK-8实验结果显示,30 aM组细胞于24 h、48 h和72 h测得的A值分别为(0.40±0.00,0.68±0.03,0.75±0.02),明显低于NC组的(0.83±0.01,1.34±0.03,2.47±0.12),差异具有统计学意义(t=-12.15,-15.66,-6.42;P =0.01,0.02,0.01);30aI组细胞测得的A值分别为(0.95±0.05,1.64±0.03,3.28±0.07),明显高于NC组,差异具有统计学意义(t=9.45,18.97,7.58;P=0.00,0.01,0.03).软琼脂克隆形成实验结果显示,30 aM组细胞的克隆形成数量为(61.81±1.76)个/孔,低于NC组的(131.96±8.15)个/孔,差异具有统计学意义(t=-8.31,P=0.00);30 aI组的克隆形成数量为(195.75±6.16)个/孔,高于与NC组,差异具有统计学意义(t=15.61,P=0.01).流式细胞术结果显示,30 aM组的细胞凋亡率为(19.67±0.06)％,高于NC组的(10.65±0.12)％,差异具有统计学意义(t=15.90,P=0.02);30 aI组的细胞凋亡率为(4.85±0.03)％,低于NC组,差异具有统计学意义(t=-6.96,P=0.00).结论 miR-30a-5p对CD133+MHCC97L肝癌干细胞的增殖具有明显的抑制效果,有望成为针对肝癌的有效靶向性治疗手段.

关键词：肝肿瘤、肿瘤干细胞、微RNAs、CD133

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分类号：R73;R39

资助基金：国家自然科学基金81201918;广东省科技计划项目2012B031800099

在线出版日期：2016-07-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：31-35