小鼠神经母细胞瘤细胞株用于A型肉毒毒素重链体外实验的可行性研究

摘要：

目的 探讨小鼠神经瘤母细胞(Neuro-2a)细胞株用于A型肉毒毒素重链(BoNT/A HC)体外细胞模型的可行性.方法 对体外培养1～5h的Neuro-2a细胞和经A型肉毒毒素(BoNT/A)重链作用的Neuro-2a细胞(细胞接种于96孔培养板后随机分为对照组、0.01 nmol/L组、0.1 nmol/L组、l nmol/L组和10 nmol/L组),进行BoNT/A HC相关受体的检测,观察BoNT/A HC作用不同时间(24、48及72 h)后BoNT/A HC对细胞突起生长状况的影响,包括有突起细胞的百分比、细胞突起的长度以及突起总数.数据经GraphPad Prism 5.0 One-way ANOVA分析.结果 体外培养后Neuro-2a细胞表达高亲和力的突触囊泡蛋白2 (SV2)和低亲和力的三涎酸神经节苷脂亚型lb (GT1b)受体.与对照组相比,BoNT/A HC能明显促进Neuro-2a细胞突起再生及突起长度增加,其中0.1nmol/L BoNT/A HC作用24 h后突起的Neuro-2a细胞百分比为(20.61±4.87)％高于对照组[(15.27±3.56)％,F=37.7,P＜0.001]、神经突起的总数量为(2.18±1.24)个高于对照组(1.68±0.99)个,(F=9.54,P＜0.001)、平均突起的长度为(38.76±38.11)μm,与对照组(23.38±27.13) μm相比差异无统计学意义;当BoNT/A HC的浓度增加为l、10 nmol/L时,有突起的Neuro-2a细胞百分比分别为(15.08±5.27)％和(12.65±5.65)％,神经突起的总数量分别为(1.65±0.85)个和(1.64±0.85)个、平均突起的长度分别为(33.75±39.11)μm和(18.95±21.71)μm,与对照组相比差别不大,差异无统计学意义.随作用时间的延长(48 h和72 h)0.1 nmol/L组有突起细胞的百分比、细胞突起的长度以及突起总数与对照组相比均增高,且差异具有统计学意义,而1,10 nmol/L组中细胞变化差异无统计学意义.结论 Neuro-2a细胞可用于BoNT/A HC体外研究的细胞模型,BoNT/A HC的作用表现为低浓度(0.1 nmol/L)的促进作用而高浓度(10 nmol/L)时呈现抑制.

关键词：肉毒毒素类、突触蛋白类、神经节苷脂类

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分类号：R73;R28

资助基金：国家自然科学基金面上项目81171178;山西省自然科学基金项目2012011036-3;山西省留学人员科研资助项目2012-047

在线出版日期：2016-05-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：23-28