钩端螺旋体c-di-AMP结合蛋白调控钾离子转运

摘要：

目的:寻找和鉴定钩端螺旋体中编码第二信使c-di-AMP结合蛋白KtrA，并探究c-di-AMP-KtrA/B系统的功能及调控机制。方法:采用PCR扩增
ktrA基因并克隆入pET42a质粒获得pET42a
ktrA原核表达载体，将其转入表达宿主菌中获得表达rKtrA的工程菌
E.
coli BL21DE3
pET42a-ktrA。通过亲和层析法提纯上述工程菌表达的重组蛋白rKtrA后，运用BIAcore技术检测rKtrA与c-di-AMP的结合能力。采用细菌双杂交法检测钩端螺旋体Ktr系统中KtrA与KtrB的结合能力以及外源c-di-AMP对其结合的调控机制。通过在钾离子转运功能缺失大肠埃希菌LB2003株中回补相关基因，分析c-di-AMP-KtrA/B通路功能。
结果:成功构建钩端螺旋体
ktrA基因原核表达工程菌，纯化的rKtrA可与c-di-AMP特异性结合；KtrA可与KtrB发生相互作用，该结合作用可被c-di-AMP解离；KtrA/B系统参与调控钾离子的摄取，该系统功能受c-di-AMP负调控。
结论:钩端螺旋体KtrA为c-di-AMP结合蛋白，c-di-AMP-KtrA/B系统参与调控钾离子的转运。

关键词：钩端螺旋体、c-di-AMP、钾离子转运

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资助基金：国家自然科学基金81971951;National Natural Science Foundation of China81971951

在线出版日期：2023-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：451-457