三基序蛋白23在树突状细胞分化成熟中的调控作用

摘要：

目的:探讨三基序蛋白23(tripartite motif-containing 23，Trim23)对树突状细胞分化成熟的影响及相关作用机制。方法:采用FMS样酪氨酸激酶3配体(FMS-like tyrosine kinase 3 ligand，Flt3L)诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells, BMDCs)，经脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)激发后，荧光定量PCR及Western blot检测BMDCs中Trim23的表达。构建Trim23过表达载体并转染BMDCs，pcDNA3.1空载体作为对照组。经LPS激发后，流式细胞术检测BMDCs表面分子CD80、CD86、CD40以及MHCⅡ的表达，ELISA检测培养上清中细胞因子IL-12p40、TNF-α、IL-6、IL-10的含量；磁珠分选出OT-Ⅰ和OT-Ⅱ小鼠脾脏和淋巴结中的CD8
+和CD4
+T细胞，加入特异性抗原卵清蛋白(ovalbumin，OVA)，与LPS激发的BMDCs共培养。流式细胞术检测不同转染组BMDCs诱导CD8
+或CD4
+T细胞增殖分化的方向。Western blot检测BMDCs内p38、ERK1/2、AKT蛋白的磷酸化水平。构建缺失RING结构域或ARF结构域的两个Trim23短截体(Trim23 ΔRING和Trim23 ΔARF)，将Trim23、Trim23 ΔRING、Trim23 ΔARF载体分别转染BMDCs，经LPS激发后，流式细胞术及ELISA检测BMDCs表面分子及细胞因子的表达水平。
结果:经LPS激发后，BMDCs中Trim23表达水平显著下调；过表达Trim23后，其表面分子MHCⅡ、CD86、CD80的表达及细胞因子TNF-α、IL-6的分泌均显著下降；与T细胞共培养结果显示，过表达Trim23可显著抑制BMDCs诱导CD4
+T细胞增殖分化以及诱导CD8
+T细胞增殖的能力；Western blot结果显示，过表达Trim23的BMDCs中p38和ERK1/2的磷酸化水平明显降低。与Trim23组比较，RING结构域的缺失显著逆转了过表达Trim23对LPS诱导的BMDCs表面分子MHCⅡ、CD86及细胞因子TNF-α、IL-6表达水平的抑制作用。
结论:过表达Trim23能够抑制BMDCs的分化成熟及免疫活化功能，其作用机制可能依赖于MAPK信号通路及Trim23的RING功能域，本研究将为靶向Trim23提高肿瘤树突状细胞疫苗的免疫应答效应提供实验参考。

关键词：树突状细胞、Trim23、功能域、免疫功能

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资助基金：国家自然科学基金32270954;江苏省自然科学基金BK20200178;常州市科技支撑计划CE20215054;江阴市卫健委面上项目S202101;National Natural Science Foundation of China32270954;Natural Science Foundation of Jiangsu ProvinceBK20200178;Changzhou Science and Technology Supporting PlanCE20215054;Jiangyin Municipal Health CommissionS202101

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：285-293