解脲脲原体GrpE蛋白促进小鼠树突状细胞成熟并诱导Th1型免疫应答

摘要：

目的:探讨解脲脲原体GrpE蛋白(
Ureaplasma urealyticum GrpE，
Uu-GrpE)对树突状细胞成熟的影响及其对T细胞极化的作用。
方法:表达纯化
Uu-GrpE蛋白并利用Western blot鉴定。分离培养小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells，BMDCs)，利用LDH试剂盒分析
Uu-GrpE的细胞毒性，流式细胞术检测
Uu-GrpE对BMDCs表面共刺激分子CD80和CD86以及主要组织相容性复合体Ⅱ类分子(major histocompatibility complex Ⅱ，MHCⅡ)表达的影响，ELISA检测其刺激BMDCs后IL-12p70、TNF-α、IL-1β和IL-6等细胞因子的表达；磁珠分选同系异体小鼠的脾脏中初始CD4
+T细胞(CD4
+Na?ve T细胞)，通过构建BMDCs与Na?ve T细胞共培养体系分析
Uu-GrpE刺激成熟的BMDCs(GrpE-BMDCs)对Na?ve T细胞增殖及极化的影响。GrpE-BMDCs经尾静脉注射免疫小鼠并利用ELISA和流式细胞术观察其所诱导的特异性体液和细胞免疫应答。
结果:成功表达
Uu-GrpE并分离出高纯度BMDCs，
Uu-GrpE可刺激BMDCs分泌IL-12p70、TNF-α、IL-1β和IL-6等细胞因子且无细胞毒性；同时
Uu-GrpE可显著增加BMDCs表面分子CD80[平均荧光强度(mean flourscence indensity，MFI)：(324.00±22.11)
vs (91.03±10.95)，
P<0.01]、CD86[MFI：(1 176.00±51.39)
vs (217.00±14.93)，
P<0.01]和MHCⅡ[MFI：(708.70±56.32)
vs (185.70±16.77)，
P<0.01]的表达；与单独GrpE-BMDCs组和GrpE(热变性)-BMDCs+T细胞组比较，GrpE-BMDCs不仅可刺激Na?ve T细胞增殖[刺激指数(stimulation index)：(7.25±0.21), (6.55±0.23), (6.09±0.35)，
P均<0.05]，并且还诱导Na?ve T细胞分泌Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ [IL-2：(145.60±14.67) pg/ml，(55.92±3.12) pg/ml，(26.05±2.40) pg/ml，
P<0.05和
P<0.01；IFN-γ：(267.20±37.80) pg/ml, (146.70±20.65) pg/ml，(27.84±6.69) pg/ml，
P均<0.05]，而Th2型细胞因子IL-4、IL-10和IL-5则无明显改变。与PBS组和PBS+BMDCs组比较，GrpE-BMDCs经过继转移后，可诱导机体产生Th1型免疫应答。
结论:Uu-GrpE蛋白明显促进BMDCs成熟及活化，且进一步证明其作为解脲脲原体候选蛋白疫苗可诱导Th1型免疫应答。

关键词：解脲脲原体、GrpE、树突状细胞、免疫应答

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在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：41-49