OpaR对副溶血弧菌 pilABCD操纵子的调控研究

摘要：

目的:研究副溶血弧菌群体感应(quorum sensing，QS)系统核心调控子OpaR对
pilABCD的转录。
方法:提取副溶血弧菌野生株(wild-type，WT)和
opaR突变株(Δ
opaR)的总RNA，采用实时定量PCR(quantitative real-time PCR，qPCR)研究OpaR对
pilA(
pilABCD首基因)的转录调控；将
pilABCD上游调控区DNA序列克隆入pHRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游，构建LacZ重组质粒，并将该重组质粒转入WT和Δ
opaR中制备LacZ菌株，通过LacZ报告基因融合试验研究OpaR对
pilA的调控以及
pilA的时相表达。提取WT株总RNA，采用引物延伸试验研究
pilABCD的转录起始位点；PCR扩增
pilABCD上游调控区DNA序列，并纯化His-OpaR蛋白，通过凝胶阻滞试验(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)研究His-OpaR与靶DNA片段是否有直接的结合作用，并进一步采用DNaseⅠ足迹试验分析其结合位点。
结果:qPCR和LacZ报告基因融合试验显示OpaR对
pilABCD的转录具有激活作用，
pilA的表达水平随培养时间的延长而持续升高；引物延伸结果显示
pilABCD只有一个转录起始位点T(-155)；EMSA和DNaseⅠ足迹试验结果显示OpaR对位于
pilA的翻译起始位点上游-246~-197 bp和-181~-131 bp之间的DNA序列具有结合活性。
结论:OpaR对
pilABCD的转录具有直接的激活活性。

关键词：副溶血弧菌、群体感应、转录调控、OpaR、pilABCD

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资助基金：中国博士后科学基金第68批面上资助2020M681513;江苏省博士后科研资助计划2020Z102;China Postdoctoral Science Foundation2020M681513;Postdoctoral Science Foundation Funded Project of Jiangsu Province2020Z102

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：906-911