目的:探讨幽门螺杆菌(
H.
pylori)诱导的人胃癌SGC-7901细胞源性外泌体中微小RNA(miRNA)的差异表达,为进一步阐明
H.
pylori的致癌机制提供新线索。
方法:超高速离心法和试剂盒提取
H.
pylori刺激组和对照组细胞释放的外泌体,采用透射电镜、纳米粒子跟踪分析和Western blot对外泌体进行鉴定;荧光染料PKH67标记的外泌体与THP-1源性巨噬细胞共孵育,共聚焦显微镜观察巨噬细胞内吞外泌体的情况;miRNA基因芯片分析两组细胞外泌体miRNA差异表达谱,采用qRT-PCR对其中4个差异表达miRNA进行验证;生物信息学软件预测、分析部分差异表达miRNA结合的靶基因及其功能和可能参与的信号通路。Cy3标记差异表达miR-382-5p,观察其能否通过外泌体传递给巨噬细胞;qRT-PCR和ELISA检测miR-382-5p mimic转染巨噬细胞表型分子CD206和细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10的表达,流式细胞术分析表达CD206和HLA-DR的细胞比例。
结果:提取的外泌体符合外泌体形态,且高表达其表面标志蛋白CD9、CD63、TSG101;外泌体与THP-1巨噬细胞共孵育12 h后被细胞内吞;与对照组相比,
H.
pylori刺激组有上调miRNA 130个、下调miRNA 111个;部分差异表达miRNA预测的靶基因主要参与调节PI3K-AKT、NF-κB、JAK-STAT、干细胞多能性等炎症和肿瘤相关通路。miR-382-5p可通过外泌体传递给巨噬细胞,诱导巨噬细胞M2型表型分子CD206和细胞因子IL-10表达,并抑制TNF-α、IL-6表达,CD206
highHLA-DR
low细胞比例升高。
结论:H.
pylori处理SGC-7901细胞导致其外泌体miRNA表达水平发生显著改变。生物信息学预测结果显示,部分差异表达miRNA的靶基因产物在炎症和肿瘤相关信号通路调节中发挥重要作用。miR-382-5p具有诱导巨噬细胞向M2极化的潜能。
幽门螺杆菌、SGC-7901细胞、外泌体、微小RNA、差异表达、巨噬细胞极化
41
湖南省自然科学基金面上项目2021JJ30605;湖南省教育厅重点项目19A423;湖南省研究生科研创新项目CX20190755;湖南省大学生创新创业训练计划项目湘教通〔2019〕219号,S201910555038;Natural Science Foundation of Hunan Province2021JJ30605;Grant For Key Projects of Hunan Provincial Education Department19A423;Hunan Provincial Innovation Foundation for PostgraduateCX20190755;Undergraduates Innovation Experimental Program of Hunan ProvinceS201910555038