基于IRES转录效率不同构建绿色荧光蛋白差异表达载体

摘要：

目的:根据IRES末端序列的不同，构建4个GFP表达强度不同的逆转录病毒载体，为后续流式检测或成像提供基础。方法:利用脑心肌炎病毒IRES的转录效率依赖于其末端的基因序列，通过重叠PCR方法将IRES与EGFP融合成4个不同连接方式的片段，然后克隆至逆转录病毒载体pMSCV-NGFR中；PCR扩增NGFR片段，克隆至逆转录病毒载体pMSCV-IRES-EGFP前面；逆转录病毒载体pMSCV-NGFR-IRES-EGFP转染293T细胞，分析EGFP的表达比例和平均荧光强度(MFI)，同时分析NGFR的表达。结果:成功构建4个逆转录病毒载体pMSCV-NGFR-IRES-EGFP；在293T细胞转染4个逆转录病毒载体，24 h和48 h时EGFP的表达效率没有明显差异，但荧光强度却有明显不同，同时NGFR的表达没有明显不同，说明IRES与EGFP之间加入不同的核苷酸序列，会使EGFP的荧光强度呈现明显差异。结论:EGFP的表达强度受IRES与EGFP之间序列的影响，不同强度EGFP的逆转录病毒载体可以适用于不同的实验要求。

关键词：翻译起始、真核生物mRNA、核糖体内部进入位点、病毒

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资助基金：北京医院博士启动基金项目bj-2018-027;北京市科协金桥工程种子资金项目ZZ19059;北京市东城区优秀人才培养资助项目2019DCT-M-11;Beijing Hospital Doctor Foundation Projectbj-2018-027;Beijing Gold-Bridge ProjectZZ19059;Beijing Dongcheng District Outstanding Talent Funding Project2019DCT-M-11

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：459-464