中国莱姆病螺旋体PD91外膜蛋白A肽段的克隆表达及其免疫保护性的初步研究

摘要：

目的:克隆并表达中国莱姆病螺旋体基因型代表菌株伽氏疏螺旋体(
Borrelia garinii，
B.
garinii)PD91外膜蛋白A(OspA)的126～274 aa肽段，并对其免疫保护性进行初步研究。
方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增
B.
garinii PD91的126～274 aa OspA肽段基因，克隆至原核表达载体pET-30a上，构建pET-30a-OspA-pep重组质粒，转入大肠埃希菌感受态细胞BL21(DE3)中，利用IPTG诱导表达，表达产物用Ni-IDA树脂层析纯化，采用Western blot分析其免疫原性。将不同剂量的重组OspA-pep(rOspA-pep)蛋白(20、30、40、50、60、80、100 μg)免疫新西兰家兔，采用间接免疫荧光法(IFA)检测免疫前后的抗体滴度，选取产生抗体滴度最高的剂量组为最佳剂量组。用最佳剂量组的免疫兔血清进行体外中和试验以检测rOspA-pep蛋白免疫后血清抗体的体外杀菌能力，同时用最佳剂量的rOspA-pep蛋白免疫新西兰家兔，观察其抗体滴度变化。
结果:重组质粒pET-30a-OspA-pep构建成功并在宿主菌体内高效表达。Western blot表明rOspA-pep蛋白与
B.
garinii PD91的多抗有明显的免疫应答。IFA检测结果表明rOspA-pep蛋白免疫后的兔血清IgG抗体滴度明显升高(最高可达1∶2 480)，40 μg为rOspA-pep的最佳免疫剂量。体外中和试验结果表明该剂量rOspA-pep蛋白免疫家兔后产生的抗体对10
6个/ml的
B.
garinii和阿弗西尼疏螺旋体(
Borrelia afzelii，
B.
afzelii)型代表菌株PD91和FP1的中和率达100%，对10
7个/ml的FP1的中和率为100%，对10
7个/ml的PD91的中和率为60%。用40 μg rOspA-pep在1 d和30 d免疫新西兰家兔2次后，其抗体达到高峰，持续时间为3～4个月，之后抗体滴度逐渐下降。
结论:中国莱姆病螺旋体基因型代表菌株
B.
garinii PD91的126～274 aa OspA肽段具有较好的免疫原性，其诱导的抗体有较好的体外中和能力，可作为中国二代亚单位疫苗的候选成分。

关键词：莱姆病螺旋体、外膜蛋白OspA肽段、克隆表达、免疫保护性

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资助基金："十三五"国家传染病科技重大专项2016ZX10004001-004;National Science and Technology Major Project for Infectious Disease Control and Prevention during the 13th Five-Year Plan Period2016ZX10004001-004

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：218-224