目的:探讨肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)在抗β
2GP1/β
2GP1复合物诱导中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)形成中的作用。
方法:分离健康人外周血中性粒细胞与抗β
2GP1/β
2GP1复合物(100 μg/ml)共孵育一定时间,Western blot检测细胞PAD4表达;进一步采用PAD4抑制剂Cl-amidine(10 μmol/L)预处理中性粒细胞,Western blot检测细胞瓜氨酸化组蛋白3(CitH3)蛋白质表达,ELISA检测细胞培养上清中髓过氧化物酶(MPO)-DNA相对含量。下腔静脉狭窄法建立APS小鼠血栓模型,并通过腹腔注射Cl-amidine(50 mg/kg)进行干预,Western blot检测血浆中CitH3蛋白质表达,荧光染色法检测血浆中循环游离DNA(cf-DNA)浓度,取下腔静脉血栓称其重量,观察Cl-amidine能否抑制APS-IgG诱导的NETs和血栓形成。组间差异采用
t检验或单因素方差分析。
结果:抗β
2GP1/β
2GP1复合物能够显著下调细胞质中PAD4蛋白质表达水平[(3.67±0.32) vs (1.47±0.19),
t=10.22,
P<0.05],并使细胞核内PAD4蛋白质含量升高[(0.57±0.19) vs (2.97±0.31),
t=11.49,
P<0.05];Cl-amidine能显著抑制抗β
2GP1/β
2GP1复合物诱导的中性粒细胞CitH3蛋白质表达[(2.46±0.47) vs (0.46±0.13),
t=12.24,
P<0.01],明显减少培养上清中MPO-DNA含量[(4.09±0.94) vs (2.80±0.57),
t=4.23,
P<0.05]。在体内试验中,Cl-amidine能显著抑制APS小鼠血浆中CitH3蛋白质表达[(3.97±0.56) vs (1.09±0.45),
t=11.83,
P<0.01],明显降低APS小鼠血浆中cf-DNA浓度[(2 685.0±735.8) vs (1 784.0±577.0),
t=3.93,
P<0.05];与对照组EAPS小鼠相比,经Cl-amidine预处理的APS小鼠血栓形成明显减小[(8.22±3.06) vs (4.89±1.90),
t=2.27,
P<0.05]。
结论:PAD4参与了抗β
2GP1/β
2GP1复合物诱导的NETs形成,其可能在APS血栓形成中发挥重要作用。
抗磷脂综合征、抗β
2GP1/β
2GP1复合物
、中性粒细胞胞外诱捕网、肽酰基精氨酸脱亚氨酶4
40
浙江省医药卫生科技计划项目2016KYA010;国家自然科学基金青年项目81600110;浙江省人民医院优秀青年人员科研启动基金ZRY2016B008;Medical Health Science and Technology Project of Zhejiang Provincial Health Commission2016KYA010;National Natural Science Foundation of China81600110;Outstanding Youth Foundation of Zhejiang Provincial People′s HospitalZRY2016B008