PAD4在抗β 2GP1/β 2GP1复合物促进中性粒细胞胞外诱捕网形成中的作用

摘要：

目的:探讨肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)在抗β
2GP1/β
2GP1复合物诱导中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)形成中的作用。
方法:分离健康人外周血中性粒细胞与抗β
2GP1/β
2GP1复合物(100 μg/ml)共孵育一定时间，Western blot检测细胞PAD4表达；进一步采用PAD4抑制剂Cl-amidine(10 μmol/L)预处理中性粒细胞，Western blot检测细胞瓜氨酸化组蛋白3(CitH3)蛋白质表达，ELISA检测细胞培养上清中髓过氧化物酶(MPO)-DNA相对含量。下腔静脉狭窄法建立APS小鼠血栓模型，并通过腹腔注射Cl-amidine(50 mg/kg)进行干预，Western blot检测血浆中CitH3蛋白质表达，荧光染色法检测血浆中循环游离DNA(cf-DNA)浓度，取下腔静脉血栓称其重量，观察Cl-amidine能否抑制APS-IgG诱导的NETs和血栓形成。组间差异采用
t检验或单因素方差分析。
结果:抗β
2GP1/β
2GP1复合物能够显著下调细胞质中PAD4蛋白质表达水平[(3.67±0.32) vs (1.47±0.19)，
t＝10.22，
P<0.05]，并使细胞核内PAD4蛋白质含量升高[(0.57±0.19) vs (2.97±0.31)，
t＝11.49，
P<0.05]；Cl-amidine能显著抑制抗β
2GP1/β
2GP1复合物诱导的中性粒细胞CitH3蛋白质表达[(2.46±0.47) vs (0.46±0.13)，
t＝12.24，
P<0.01]，明显减少培养上清中MPO-DNA含量[(4.09±0.94) vs (2.80±0.57)，
t＝4.23，
P<0.05]。在体内试验中，Cl-amidine能显著抑制APS小鼠血浆中CitH3蛋白质表达[(3.97±0.56) vs (1.09±0.45)，
t＝11.83，
P<0.01]，明显降低APS小鼠血浆中cf-DNA浓度[(2 685.0±735.8) vs (1 784.0±577.0)，
t＝3.93，
P<0.05]；与对照组EAPS小鼠相比，经Cl-amidine预处理的APS小鼠血栓形成明显减小[(8.22±3.06) vs (4.89±1.90)，
t＝2.27，
P<0.05]。
结论:PAD4参与了抗β
2GP1/β
2GP1复合物诱导的NETs形成，其可能在APS血栓形成中发挥重要作用。

关键词：抗磷脂综合征、抗β 2GP1/β 2GP1复合物 、中性粒细胞胞外诱捕网、肽酰基精氨酸脱亚氨酶4

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在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：115-121