肠道病毒-D68 2A蛋白对抗病毒IFN-Ⅰ通路影响的研究

摘要：

目的 观察肠道病毒(EV)-D68蛋白2A在EV-D68病毒感染293T细胞过程中对抗病毒IFN-Ⅰ通路的影响.方法 免疫印迹法(Western blot)检测重组2A蛋白、IFN-α因子及信号传导及转录激活因子1(STAT1)的蛋白表达水平;免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)检测细胞内不同时间点EV-D68病毒VP1与2A的表达;通过观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),计算细胞培养半数感染量(50％cell culture infective dose,CCID50)来检测病毒感染性滴度;利用实时荧光定量PCR技术(real-time PCR,RT-PCR)检测IFN-Ⅰ干扰素产生相关基因的表达.结果 成功构建pCLIPf-2A质粒,在转染后的24 h,重组蛋白2A有较好的表达.病毒滴度结果表明,2A蛋白在感染后期可以有效促进EV-D68病毒的增殖复制.IFN-α干扰素检测结果表明,EV-D682A可以刺激IFN-α的表达.IFN-Ⅰ干扰素相关基因检测表明,EV-D68+2A组、2A组及EV-D68对照组的IFN-Ⅰ干扰素产生相关基因的IFN-αmRNA水平均有不同程度的上调或下调,但是三者诱导相关基因表达上调、下调的趋势不同.对IFN-Ⅰ干扰素通路下游蛋白STAT1检测结果表明,各组均能有效诱导STAT1蛋白的表达.结论 EV-D682A可以促进抗病毒IFN-Ⅰ通路相关基因及下游蛋白的应答,病毒感染后期,2A可以促进病毒较快增殖.

关键词：EV-D68病毒感染、2A蛋白、抗病毒IFN-Ⅰ通路

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资助基金：中国医学科学院医学与健康科技创新工程2017-I2M-2-006;国家自然科学基金31570900Chinese Academy of Medical Sciences Innovation Fund for Medical and Healthy Sci-ences2017-I2M-2-006;National Nature Science Foundation of China31570900

在线出版日期：2019-07-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：401-409